РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ	(19) RU (11) 2 279 087 (13) C2
	(51) МПК G01N 33/53 (2006.01)

Статус:	не действует (последнее изменение статуса: 02.07.2021)
Пошлина:	учтена за 3 год с 24.07.2006 по 23.07.2007. Возможность восстановления: нет.

(21)(22) Заявка: 2004122769/15, 23.07.2004 (24) Дата начала отсчета срока действия патента: 23.07.2004 (43) Дата публикации заявки: 27.01.2006 Бюл. № 3 (45) Опубликовано: 27.06.2006 Бюл. № 18 (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: WILKINSON КА et al. Immune responses to recombinant proteins of Mycobacterium leprae. J Infect Dis. 1999 Apr, 179(4), p.1034-1037, реф. RU 2171689 C1, 10.08.2001. EP 0132754 A2, 13.02.1985. FLIES EL et al. Immunological examination of patients with undetermined leprosy. Rev Asoc Argent Microbiol. 1975, Sep-Dec, 7(3), p.81-85, реф. Адрес для переписки: 414057, г.Астрахань, пр. Н. Островского, 3, ГУ Научно-исследовательский институт по изучению лепры Министерства здравоохранения и социального развития РФ

(72) Автор(ы): Балыбин Евгений Сергеевич (RU), Урляпова Наиля Гайфуловна (RU) (73) Патентообладатель(и): ГУ Научно-исследовательский институт по изучению лепры Министерства здравоохранения и социального развития РФ (RU)

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОРМЫ ЛЕПРЫ

Изобретение относится к области медицины, а именно к лепрологии, и может быть, в частности, использовано для определения формы заболевания.

Существующие в настоящее время основные способы диагностики лепры (традиционные: клинический осмотр, бактериоскопическое и гистологическое исследование поражений, включающее определение бактериального и гистологического индекса) оказываются недостаточно информативными и точными при определения ее пограничных форм в соответствии с принятой в мире классификацией Ридли-Джоплинга (Ridley D.S. and Jopling W.H. A classification of leprosy for research purposes. Leprosy Review, 1962, Vol.XXXIII, N.2, P.119-128), предопределяющей последующую стратегию ведения больного. Разработанные после выхода в свет вышеназванного основополагающего труда, так называемые иммунодиагностические способы, способствующие повышению точности диагностики лепры, позволяющие более глубоко оценить состояния резистентности организма, до конца не решают проблему определения формы заболевания.

Так, известен иммунодиагностический способ, который в комплексе с традиционными способами может быть применен для определения формы лепры (Thole J.E.R., Janson A.A.M., Kiffe A., Howe R.C., McLean К., Nurilygn A., Filley В., Shannon E.J., Bulla G.J., Hermans J., Vries R.R.P., Frommel D., Wit T.F.R. Analysis of T-cell and B-cell responses to recombinant M. leprae antigens in leprosy patients and in healthy contacts: significant T-cell responses to antigens in M. leprae nonresponders. Int. J. Leprosy, 1995, Vol.63, P.369-380), заключающийся в том, что выделенные из периферической крови мононуклеарные клетки инкубируют в плашках с питательной средой, содержащей различные антигенные препараты M.leprae, и по степени накопления ³Н-тимидина, добавленного к клеткам за 18 часов до окончания срока инкубации и свидетельствующей об интенсивности ответа этих клеток на стимуляцию специфическими антигенами, определяют форму лепры.

Существенным недостатком известного способа является то, что он не дает возможность достаточно четко различить между собой пограничные формы лепры (в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга), что не позволяет получить конкретный технический результат - повышение точности и информативности способа.

Известен также иммунодиагностический способ, который в комплексе с традиционными способами может быть применен для определения формы лепры (Vikerfors Т., Olcen P., Wiker H., Watson J.D. Serological response in leprosy and tuberculosis patients to the 18-kDa antigen 85B ofmycobacterium bovis BCG. Int. J. Leprosy, 1993, Vol.61, P.571-579), заключающийся в том, что в сыворотке периферической крови больных с помощью иммуноферментного анализа изучают антитела к фенольному гликолипиду и рекомбинантному белку на 18 килодальтон, то есть к специфическим антигенам M.leprae, и по количеству этих антител (опосредованно путем оценки оптической плотности) определяют форму лепры.

Существенным недостатком известного способа является то, что он не дает возможность достаточно четко различить между собой пограничные формы лепры (в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга), что не позволяет получить конкретный технический результат - повышение точности и информативности способа.

Наиболее близким способом к предлагаемому является иммунодиагностический способ, который в комплексе с традиционными способами может быть применен для определения формы лепры (Wilkinson K.A., Katoch К., Sengupta U., Singh M., Sarin K.K., Ivanyi J., Wilkinson R.J. Immune responses to recombinant proteins of Mycobacterium leprae. J. Infect. Dis., 1999, Vol.179, P.1034-103 7), заключающийся в том, что по периферической крови больных, нагруженных рекомбинантными белками M.leprae, определяют состояние продукции гамма-интерферона, свидетельствующей о принадлежности больного к той или иной форме заболевания. Сходство данного способа с предлагаемым заключается в том, что оба определяют форму лепры путем иммунодиагностического исследования периферической крови больных, при нагрузке специфическими антигенами M.leprae.

Недостатками известного способа являются:

- недостаточная точность способа, что не позволяет различить между собой пограничные формы лепры;

- недостаточная информативность способа, что не позволяет достаточно надежно различить между собой полярные формы лепры.

Таким образом, перечисленные недостатки не позволяют получить конкретный технический результат - повышение диагностической точности и информативности способа.

Предлагаемое изобретение решает основную задачу - повышение точности и информативности определения формы лепры. Сущность изобретения выражена совокупностью существенных признаков, достаточных для обеспечиваемого изобретением технического результата.

Решение поставленной задачи предлагаемым способом состоит в том, что в выделенных из периферической крови мононуклеарных клетках, инкубируемых от 0,5 до 24 часов с лепронином в концентрации 20 мкг/мл, определяют уровень циклического аденозинмонофосфата и по полученному характеру временной динамики этого уровня определяют форму лепры. Применение предлагаемого способа дает положительный результат, заключающийся в повышении точности и информативности диагностического процесса, что позволяет в комплексе с традиционными способами диагностики более надежно разграничить не только полярные, но и пограничные формы лепры и способствует тем самым более эффективной борьбе с этим заболеванием за счет оптимизации проводимых противолепрозных лечебно-профилактических и организационный мероприятий.

Проблема определения формы лепры является одной из актуальных в современной лепрологии. Проведенные исследования показали существенное различие при разных формах лепры временной динамики уровня циклического аденозинмонофосфата (пАМФ) в мононуклеарных клетках (мононуклеары), инкубируемых с лепронином (ЛПН - антиген М.leprae) в вышеназванной концентрации.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

У вновь поступившего больного с активной стадией лепры между 9 и 10 часами утра производят забор периферической крови из локтевой вены в количестве 3,0 мл. Из этой крови выделяют мононуклеары в соответствии со стандартной описанной технологией (Byum A. "Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood." Scand. J. Clin. Lab. Invest, 1968, Vol. 21, Suppl. 97 (Paper IV), P.77-89). Полученные клетки вносят в пробирки с питательной средой, содержащей по 20 микрограммов на 1 мл (мкг/мл) ЛПН и помещают в термостат. Сроки инкубации составляют 0,5, 2, 20 и 24 часа. Предварительные испытания показали, что инкубация мононуклеаров с ЛПН менее 0,5 часа и более 24 часов существенной информации не несет (см. Пример 1). По истечении каждого из вышеустановленных нами сроков инкубации из одной пробирки берут строго определенное количество мононуклеаров и переносят во флаконы для обработки ультразвуком, клетки разрушают ультразвуком на аппарате Ultrasonic cell disrupter K-881440-0230 (фирма «Kontes», США) при следующих технических режимах: величина энергии - 8, значение настройки - 2, время экспозиции - 1 минута.

Из полученных гомогенатов в соответсвии со стандартными описанными технологиями цАМФ сначала экстрагируют (Методическое руководство к радиоиммунологическому тест-набору реагентов для определения циклического гуанозинмонофосфата в биологических средах фирмы "Amer-sham", Англия, 20 с.), а затем определяют его уровень (Tovey K.C., Oldham K.G. and Whelan J.A.M. A simple direct assay for cyclic AMP in plasma and other biological samples using an improved competitive protein binding technigue.

Clinica Chimica Acta, 1974, Vol.56, P.221-234), который выражают в пикомолях (пмоль) на 10⁶ мононуклеаров. На основе полученных результатов для каждого больного в соответствии со стандартной технологией (программа Excel фирмы "Microsoft", США) строят график, отражающий временную динамику уровня цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН в вышеназванной концентрации. По полученному графику определяют форму лепры.

Предлагаемый способ апробирован в течение последних 19 лет в Научно-исследовательском институте по изучению лепры Минздрава РФ (г.Астрахань) на 67 больных разными формами лепры в активной стадии заболевания.

Ниже приводится результат апробации.

Пример 1. Больной П., 1910 г.р., № истории болезни 2764.

При осмотре по всему кожному покрову наблюдаются инфильтраты красновато-ржавого и синюшного цвета с нечеткими границами. На их фоне определяются дермальные лепромы размером 0,3×0,5 см, плотные синюшно-коричневого цвета, преимущественно локализованные в виде скоплений на предплечьях, плечах, единичные на животе, ягодицах. Нервные стволы не утолщены, безболезненны, гипестезия простирается от кончиков пальцев до локтевых и коленных суставов на верхних и нижних конечностях соответственно.

Лепроминовая проба отрицательная.

Данные гистологического исследования: умеренно выраженные сливающиеся между собой преимущественно поверхностные инфильтраты, состоящие в основном из макрофагов, в различной степени вакуолизированных, заполненных гомогенными и зернистыми микобактериями. В небольшом количестве определяются диффузно-рассеянные лимфоциты и полинуклеарные лейкоциты. БИ составил 5+, ГИ - 4,5.

В соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга (библиографические данные приведены выше) установлен диагноз: лепроматозная форма лепры (LL).

Уровни цАМФ в мононуклеарах, выделенных из периферической крови больного, определялись описанным выше способом, однако сроки инкубации были изменены с введением запредельных значений по отношению к вышеописанной технологии. Полученные данные представлены в таблице 1.

Таблица 1
Уровень цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН
Сроки инкубации в часах	0	0,25	0,5	24	25
Уровень цАМФ в пмоль/106 клеток	11,8	11,7	15,9	81,2	81,1

Обращает на себя внимание то, при сроке инкубации мононуклеаров с лепронином, составляющем 0,25 часа, уровень цАМФ практически не отличается от исходного; а при сроке инкубации, составляющем 25 часов, идентичен таковому на 24 часу инкубации.

Изложенная сущность наглядно представлена на фиг.1.

Таким образом, инкубация мононуклеаров из периферической крови с лепронином менее 0,5 часа и более 24 часов не несет существенной информации, а следовательно, сроки этой инкубации могут быть ограничены 0,5-24 часами.

Пргшер 2. Больная К., 1958 г.р., № истории болезни 3685. При осмотре наблюдается синюшного цвета глубокая диффузная без четких границ инфильтрация кожных покровов в области лица, включая ушные раковины, шеи, тыла кистей, предплечий, ягодиц, бедер и голеней. На фоне инфильтрации во всех указанных областях отмечаются множественные, сливающиеся между собой лепромы от 0,3-0,5 см до 2-3 см в диаметре; единичные лепромы - на коже грудных желез. Периферические нервные стволы не утолщены, безболезненны. Легкая гипестезия выявляется на тыле кистей и разгибательной поверхности предплечий до верхней трети, на ногах до коленных суставов.

Лепроминовая проба отрицательная.

Результат гистологического исследования: множественные крупные сливающиеся между собой инфильтраты, состоящие, в основном, из макрофагов, в различной степени вакуолизированных и суданофильных, содержащих большое количество преимущественно гомогенных микобактерий; единичные диффузно-рассеянные лимфоциты и фиброциты. Бактериальный индекс (БИ) составил 5+, гистологический индекс (ГИ) - 4,9.

В соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга (библиографические данные приведены выше) установлен диагноз: лепроматозная форма лепры (LL).

Уровни цАМФ в мононуклеарах, выделенных из периферической крови больной, и, определенные в соответствии вышеописанным способом, представлены в таблице 2.

Таблица 2
Временная динамика уровня цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН
Сроки инкубации в часах	0	0,5	2	20	24
Уровень цАМФ в пмоль/106 клеток	10,4	19,7	7,3	9,6	85,4

Обращает на себя внимание резкий подьем уровня цАМФ (в несколько раз превышающий его исходную величину) через 24 часа после начала инкубации с ЛПН, сочетающийся с незначительными колебаниями этого уровня при других сроках инкубации.

Характерные черты рассмотренной динамики представлены на фиг.2.

Таким образом, по максимальному подъему уровня цАМФ в мононуклеарах из периферической крови, в несколько раз превышающему исходный уровень к 24 часу инкубации с лепронином, сочетающемуся с незначительными колебаниями этого уровня при других сроках инкубации, определяют лепроматозную форму лепры (LL - в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга).

Пример 3. Больной У., 1932 г.р., № истории болезни 3661.

При осмотре наблюдается нижеследующее. Брови разрежены. Поверхностная инфильтрация кожи расположена в области лба (центр), подбородка, шеи, плеч, предплечий, бедер (на последних - начинается от подколенных ямок и простирается сзади до нижних квадрантов ягодиц, спереди - до средней трети бедер). Глубокая инфильтрация кожи отмечается в области надбровных дуг, щек, крыльев носа и голеней, переходящая с последних на своды стоп. Очаговые инфильтраты найдены (в скобках указаны размеры в см) в области левого соска (8×9), спины (1,5×2 и 3×5), на передней поверхности грудной клетки справа (2×2 и 3×4); кольцевидный элемент размером 7×15 см с гипопигментной центральной частью и окруженный бордюром - в эпигастрии. За последние полгода стал отмечать боли ломящего характера в руках и правом бедре, ягодице, зябкость стоп и отсутствие на них пота. Амиотрофий нет. Чувствительность снижена на элементах с выводом за пределы на 0,5 см. Гипестезия регистрируется на правой кисти в зоне локтевого нерва; на ногах - от стоп до нижней трети голени по передней поверхности. Умеренно утолщены локтевые (в кубитальной части), большие ушные и малоберцовые нервы (у лодыжек), последние болезнены при пальпации.

Лепроминовая проба отрицательная.

Данные гистологического исследования: умеренно выраженные очаги инфильтрации, состоящие из невакуолизированных макрофагов, содержащих рассеянные преимущественно гомогенные микобактерии; местами - из клеток эпителиоидного типа. Довольно много лимфоцитов, расположенных диффузно. БИ составил 3,5+, ГИ - 3,0.

В соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга (библиографические данные приведены выше) установлен диагноз: погранично-лепроматозная форма лепры (BL).

Уровни цАМФ в мононуклеарах, выделенных из периферической крови больного, определенные в соответствии с вышеописанной технологией, представлены в таблице 3.

Таблица 3
Временная динамика уровня цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН
Сроки инкубации в часах	0	0,5	2	20	24
Уровень цАМФ в пмоль/106 клеток	16,1	15,9	7,8	2,9	1,2

Обращает на себя внимание то, что по мере нарастания срока инкубации с ЛПН уровень цАМФ в мононуклеарах продолжает снижаться, достигая в сравнении с исходным уровнем незначительных величин к 24 часу инкубации.

Характерные черты рассмотренной динамики представлены на фиг.3.

Таким образом, по прогрессирующему снижению уровня цАМФ в мононуклеарах по мере нарастания срока их инкубации с лепронином, достигающему к 24 часу незначительной величины в сравнении с исходной, определяют погранично-лепроматозную форму лепры (BL - в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга).

Пример 4. Больной X., 1957 г.р., № истории болезни 3689.

При осмотре на кожном покрове туловища, конечностей округлые элементы типа эритематозных бляшек до 1 см в диаметре, коричневатого цвета. На коже поясничной области справа бляшковидный элемент овальной формы размером 3×2 см с гиперпегментным папулезным бордюром и более светлым центром. Атрофия мышц кистей, ладони плоские, кисти «когтистые». Локтевые нервы в кубитальной части на протяжении 10 см резко утолщены, плотные. Умеренно утолщены малоберцовые нервы у головки одноименной кости, безболезненны. Гипестезия по полиневритическому типу от кончиков пальцев до средней трети плеч с захватом локтевых ямок, на ногах до коленных суставов и подколенных ямок.

Лепроминовая проба отрицательная.

Данные гистологического исследования: умеренно выраженные периваскулярные и перифолликулярные инфильтраты, состоящие, в основном, из клеток эпителиоидного типа и гистиоцитов с набухшей, местами суданофильной цитоплазмой, содержащей скопления зернистых микобактерий и кислотоупорных зерен, изредка - единичные гомогенные микобактерий. БИ составил 3+, ГИ - 2,2.

В соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга (библиографические данные приведены выше) установлен диагноз: пограничная форма лепры (ВВ).

Уровни цАМФ в мононуклеарах, выделенных из периферической крови больного, определенные в соответствии вышеописанной технологией, представлены в таблице 4.

Таблица 4
Временная динамика уровня цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН
Сроки инкубации в часах	0	0,5	2	20	24
Уровень цАМФ в пмоль/106 клеток	22,2	14	3	24,1	4,6

Обращает на себя внимание то, что после предварительного существенного снижения ко 2 часу инкубации с ЛПН уровень цАМФ в мононуклеарах из периферической крови к 20 часу инкубации повышается. Достигнув порядка его исходной величины, к 24 часу инкубации он вновь снижается до значений, близких к таковым, при двухчасовой инкубации.

Характерные черты указанной динамики наглядно представлены на фиг.4.

Таким образом, по повышению уровня цАМФ в мононуклеарах из периферической крови, возникающему после предварительного его существенного снижения, и достигающего порядка его исходной величины к 20 часу инкубации с лепронином и претерпевающего вновь снижение к 24 часу инкубации до величин, свойственных двухчасовой инкубации, определяют пограничную форму лепры (ВВ - в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга).

Пример 5. Больной А., 1926 г.р., № истории болезни 3688.

При осмотре очаговые инфильтраты кожи с довольно четкими границами округлых очертаний красновато-коричневого цвета наблюдаются в области лба, правой надбровной дуги, нижней губы (диаметр каждого около 1 см), правого и левого плеча (далее в скобках размеры поражений в см: 4,5×3 и 4×3,5 соответственно), разгибательной поверхности левого предплечья (5×4, окружен папулезным бордюром, в центре - гипопигментация), на передней и задней поверхности грудной клетки (3×2), в области пупка (1×0,5), поясницы (2×1), ягодиц (3×2 и 1×1,5), левой голени (переднемедиальная поверхность, 9×10), правой голени (латеральная поверхность, 8×9,5). Поверхностные инфильтраты синюшно-коричневатого цвета с нечеткими границами имеются в области икроножных мышц; располагаются симметрично по наружным краям и занимают 2/3 голеней. В нижней трети голеней и на стопах (преимущественно на наружных и внутренних поверхностях последних) располагаются инфильтраты более глубокие и с более четко выраженными границами синюшного цвета. На всех описанных элементах, с выходом за их пределы на 1,5-2 см, имеется снижение чувствительности. Локтевые нервы умеренно утолщены, безболезненные. Отмечается умеренно выраженная атрофия мышц кистей. Сгибательная контрактура II фаланги V пальцев кистей, мизинцы не приводит. Утолщен и болезненен при пальпации нерв у наружной лодыжки справа, кожный нерв на стопе и у внутренней лодыжки слева. Болезненны точки проекции n.peroneus справа в нижней трети голени, гипестезия в зоне его иннервации.

Лепроминовая проба слабо положительная.

Данные гистологического исследования: Крупные очаги инфильтрации во всех отделах дермы. Преобладают хорошо дифференцированные несколько набухшие клетки эпителиоидного типа; встречаются единичные гигантские клетки типа Лангханса. Довольно много лимфоцитов, располагающихся преимущественно в периферических отделах инфильтратов. В соединительной ткани дермы часто встречаются мастоциты. В эпителиоидных клетках изредка обнаруживаются единичные гомогенные микобактерии. БИ составил 2,0+, ГИ - 0,7.

В соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга (библиографические данные приведены выше) установлен диагноз: погранично-туберкулоидная форма лепры (ВТ).

Уровни цАМФ в мононуклеарах, выделенных из периферической крови больного, определенные в соответствии вышеописанной технологией, представлены в таблице 5.

Таблица 5
Временная динамика уровня цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН
Сроки инкубации в часах	0	0,5	2	20	24
Уровень цАМФ в пмоль/106 клеток	29,3	5,7	41,2	7,9	8,9

Обращает на себя внимание то, что после предварительного существенного снижения ко 0,5 часу инкубации с ЛПН уровень цАМФ в мононуклеарах из периферической крови ко 2 часу инкубации повышается, несколько превосходя его исходную величину. К 20 часу инкубации он вновь снижается до значений, близких к таковым, при получасовой инкубации и не претерпевает существенных изменений к 24 часу инкубации.

Характерные черты указанной динамики наглядно представлены на фиг.5.

Таким образом, по повышению уровня цАМФ в мононуклеарах из периферической крови, возникающему после предварительного его существенного снижения и несколько превосходящему его исходную величину к 2 часу инкубации с лепронином и претерпевающему вновь снижение к 20 часу инкубации до величин, сопоставимых с таковыми после получасовой инкубации, определяют погранично-туберкулоидную форму лепры (ВТ - в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга).

Пример 6. Больная А., 1941 г.р., № истории болезни 3754.

При осмотре на кожных покровах наблюдаются бляшковидные элементы в следующем количестве: по 3 - на каждой щеке (далее в скобках даны размеры поражений в см) (слева - от 1×1,5 до 1,5×2; справа - от 2×3 до 3×3,5), 1 - на верхней трети правого плеча (5×5,5), 1 - на нижней трети правого бедра (4×5), по 1 - на каждой голени (слева - область сустава - 10×18, справа - наружная поверхность - 6×8), по 1 - на стопах (слева - 3×2,5, справа - 15×18); слева обширный инфильтрат сложной формы простирается от нижней трети плеча до тыла кисти и ее ладонной поверхности снаружи, захватывая заднюю поверхность локтевого сустава, наружную поверхность предплечья. Описанные элементы имеют четкие границы с видимо здоровой кожей, окруженные бордюром из папулезных высываний, цвет элементов колеблется от ярко-красного до багрово-красного, в центре их отмечается гипопигментация.

Лепроминовая проба положительная.

Данные гистологического исследования: на фоне отека дермы наблюдается обширная инфильтрация с частичным захватом субэпидермальной зоны. Инфильтраты состоят из скоплений эпителиоидных клеток с примесью лимфоцитов, окруженных гигантскими клетками Лангханса и полинуклеарами. Встречаются единичные гомогенные микобактерии, лежащие внеклеточно. Мелкие кожные нервы со стертой структурой, инфильтрированны лимфоцитами. БИ составил +, ГИ - 0,9.

В соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга (библиографические данные приведены выше) установлен диагноз: туберкулоидная форма лепры (ТТ).

Уровни цАМФ в мононуклеарах, выделенных из периферической крови больной, определенные в соответствии вышеописанным способом, представлены в таблице 6.

Таблица 6
Временная динамика уровня цАМФ в мононуклеарах, инкубируемых с ЛПН-
Сроки инкубации в часах	0	0,5	2	20	24
Уровень цАМФ в пмоль/106 клеток	39,1	59,1	5,4	8,7	9,1

Обращает на себя внимание подъем уровня цАМФ в мононуклеарах из периферической крови, несколько превышающий исходный уровень и приходящийся на 0,5 часа от начала инкубации с ЛПН. В последующем наблюдается снижение этого уровня, достигающего минимального значения на 2 часу инкубации и имеющего тенденцию к несущественному повышению к 24 часу инкубации.

Характерные черты рассмотренной динамики представлены на фиг.6.

Таким образом, по подъему уровня цАМФ в мононуклеарах из периферической крови, приходящемуся на 0,5 часа инкубации и несколько превышающему его исходный уровень, и по последующему резкому снижению уровня цАМФ ко 2 часу инкубации и несущественному последующему повышению его к 24 часу инкубации определяют туберкулоидную форму лепры (ТТ - в соответствии с классификацией Ридли-Джоплинга).

Таким образом, автором впервые предложен никем ранее не предлагавшийся способ, заключающийся в повышении точности и информативности определения формы лепры, что позволяет точно разграничить не только полярные, но и пограничные формы этого заболевания.

Определение формы лепры является важнейшей составляющей процесса диагностики лепры, поскольку форма заболевания является показателем активности микобактериального процесса, показателем резистентности организма. От степени активности лепрозного процесса зависит как характер назначаемой специфической химиотерапии, так и ее продолжительность. Например, при полярной туберкулоидной форме лепры химиотерапия носит дискретный характер, в то время как при лепроматозной форме она назначается пожизненно. По степени активности лепрозного процесса оценивается степень его эпидемиологической опасности, что является определяющим при решении вопроса о госпитализации больного. С одной стороны необходим учет интересов больного (длительная изоляция - существенный психотравмирующий фактор), с другой - общества в целом. Степенью активности лепрозного процесса определяется прогноз в отношении сохранения трудоспособности. Например, туберкулоидные формы заболевания, отличаясь более легким течением, дают нередко тяжелые осложнения со стороны периферической нервной системы, ведущие к инвалидности. От степени активности заболевания зависит характер и длительность амбулаторного наблюдения за больным в период ремиссии.

Способствуя более точному определению формы лепры, а следовательно, степени активности лепрозного процесса, предлагаемый способ в комплексе с традиционными способами содействует более точному планированию необходимых лечебно-профилактических и организационных мероприятий, а следовательно, - более эффективной борьбе с этим заболеванием.

Предлагаемый способ определения формы лепры может быть рекомендован для применения в клинике противолепрозных учреждений.

Формула изобретения

Способ определения формы лепры, состоящий в исследовании периферической крови, отличающийся тем, что в выделенных из периферической крови мононуклеарных клетках определяют исходный уровень циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), инкубируют мононуклеары с лепронином в концентрации 20 мкг/мл и определяют уровень цАМФ в мононуклеарах через 0,5, 2, 20, 24 ч инкубации и по полученному характеру временной динамики этого уровня определяют форму лепры, причем

лепроматозную форму лепры определяют по максимальному подъему уровня цАМФ в мононуклеарах, в несколько раз превышающему его исходный уровень к 24 ч инкубации с лепронином, сочетающемуся с незначительными колебаниями этого уровня при 0,5, 2 и 20 ч;

погранично-лепроматозную форму лепры определяют по прогрессирующему снижению уровня цАМФ в мононуклеарах по мере нарастания срока их инкубации с лепронином, достигающему к 24 ч незначительной величины в сравнении с исходной;

пограничную форму лепры определяют по повышению уровня цАМФ в мононуклеарах из периферической крови, возникающему после предварительного его существенного снижения, и достигающего порядка его исходной величины к 20 ч инкубации с лепронином и претерпевающего вновь снижение к 24 ч инкубации до величин, свойственных двухчасовой инкубации;

погранично-туберкулоидную форму лепры определяют по повышению уровня цАМФ в мононуклеарах, возникающему после предварительного его существенного снижения, и несколько превосходящему его исходную величину к 2 ч инкубации с лепронином и претерпевающему вновь снижение к 20 ч инкубации до величин, сопоставимых с таковыми после получасовой инкубации;

и туберкулоидную форму лепры определяют по подъему уровня цАМФ, приходящемуся на 0,5 ч инкубации и несколько превышающему его исходный уровень и по последующему резкому снижению уровня цАМФ ко 2 ч инкубации и несущественному последующему повышению его к 24 ч инкубации.

ИЗВЕЩЕНИЯ

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

(21) Регистрационный номер заявки: 2004122769

Дата прекращения действия патента: 24.07.2007

Извещение опубликовано: 27.02.2009БИ: 06/2009