РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ	(19) RU (11) 2 455 025 (13) C1
	(51) МПК A61K 39/395 (2006.01) A61P 9/10 (2006.01)

Статус:	не действует (последнее изменение статуса: 02.07.2021)
Пошлина:	учтена за 6 год с 11.02.2016 по 10.02.2017. Возможность восстановления: нет.

(21)(22) Заявка: 2011104605/15, 10.02.2011 (24) Дата начала отсчета срока действия патента: 10.02.2011 Приоритет(ы): (22) Дата подачи заявки: 10.02.2011 (45) Опубликовано: 10.07.2012 Бюл. № 19 (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: RU 2302239 С1, 10.07.2007. RU 2005113954 А, 20.11.2006. RU 2353977 С1, 27.04.2009. Адрес для переписки: 308015, г.Белгород, ул. Победы, 85, НИУ "БелГУ", отдел интеллектуальной собственности, Н.Д. Цуриковой

(72) Автор(ы): Покровский Михаил Владимирович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Арустамова Анна Александровна (RU), Хощенко Юрий Александрович (RU), Белоус Александр Сергеевич (RU), Заболотнева Юлия Александровна (RU), Якушев Владимир Иванович (RU), Бесхмельницына Евгения Александровна (RU) (73) Патентообладатель(и): Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

(54) СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ИШЕМИИ КОНЕЧНОСТИ СМЕСЬЮ РАСТВОРОВ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ РАЗВЕДЕНИЙ

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии конечности.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции ишемии конечности (RU 2302239, опубл. 10.07.2007), который заключается в том, что в эксперименте лабораторному животному с экспериментальной ишемией конечности вводят внутрибрюшинно L-аргинин однократно с 7-го по 28-й день после моделирования ишемии в дозе от 30 до 200 мг/кг.

Недостатком известного решения является то, что прием L-аргинина вызывает побочные эффекты, а именно эмбриотоксичность, тератогенность и мутагенность.

Задачей изобретения является разработка эффективного способа коррекции ишемии конечности, позволяющего исключить наличие побочных эффектов.

Поставленная задача достигается тем, что в эксперименте лабораторному животному с экспериментальной ишемией конечности коррекцию ишемии конечности проводят путем ежедневного, в течение 28 дней после моделирования ишемии, введения внутрижелудочно смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200, два раза в сутки в дозе 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут).

Основным преимуществом предлагаемого способа является отсутствие эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенности фармакологического агента, так как он относится к новому классу препаратов сверхмалых доз (СМД) антител.

Междисциплинарные исследования, проводимые в течение более чем 6 лет в ряде научно-исследовательских и клинических учреждений России, позволили выявить основные механизмы, лежащие в основе биологических и клинических эффектов сверхмалых доз (СМД) антител, вводимых перорально. Потенцированные антитела к фактору роста эндотелия VEGF -С12, С30, С200 (действующее вещество в составе препарата разведено в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз соответственно) проявляют противоишемическое действие вследствие активации ими по принципу «обратной связи» выработки VEGF. Данный фактор индуцирует экспрессию эндотелиальной NO-синтазы и образование оксида азота II (NO), который в свою очередь является регулятором функции эндотелия и медиатором неоваскулогенеза. Оксид азота II диффундирует в гладкомышечные клетки сосудов, что приводит к их расслаблению. Доклинические исследования подтвердили отсутствие эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенности у препаратов сверхмалых доз антител (Эпштейн О.И. Фармакология сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам функций: дис.... д-ра мед. наук / О.И.Эпштейн. - Томск, 2003. - С.352).

Способ осуществляется следующим образом.

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 250-300 г. Моделирование ишемии конечности проводили под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерии голени.

Оценка микроциркуляции в мышцах голени животного проводится при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекают участок кожи в переднебоковом участке области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой).

Регистрация уровня микроциркуляции проводится в группах животных: интактные; ложнооперированные; с моделированием ишемии конечности (контроль); с коррекцией ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200.

Смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 ежедневно вводили в дозе 4,5 мл/кг два раза в сутки в течение 28 дней после моделирования ишемии.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ СПОСОБА

Уровень микроциркуляции в правой и левой мышцах голени интактных животных не отличался друг от друга и составлял 525,7±9,8 п.е. (перфузионных единиц). Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1. интактные (n=10);

2. ложнооперированные (n=10);

3. с моделированием ишемии мышцы голени (n=10);

4. с моделированием ишемии мышцы голени+смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 (n=10).

Моделирование ишемии мышцы голени у крыс осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени. Коррекцию ишемии конечности производили внутрижелудочным введением смеси растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг два раза в сутки (9 мл/кг/сут) ежедневно с 1-го по 28-й день после моделирования ишемии.

Оценку микроциркуляции в мышцах голени животного проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США) на 28 сутки. Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекали участок кожи в переднебоковой области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой). Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.

Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных на 28 сутки при моделировании ишемии конечности и ее коррекции смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 в дозе 9 мл/кг/сут представлены в таблице (табл.1).

Таблица 1
Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени на 28 сутки (M±m), п.е. (перфузионные единицы)
Интактные (n=10)	525,7±9,8
Ложнооперированные (n=10)	531,8±12,8
Ишемия конечности (n=10)	361,3±8,7*
Ишемия конечности+смесь р-ров гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF -С12, С30, С200(n=10)	486,1±18,8**
Примечание: * - p<0,05 в сравнении с интактной группой животных; ** - p<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности

Из таблицы видно, что уровень микроциркуляции после операции моделирования ишемии задней конечности составил на 28 сутки 361,3±8,7 п.е., что достоверно ниже значения в группе интактных (p<0,001) и ложнооперированных животных (p<0,001).

На фоне коррекции патологии смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 486,1±18,8 п.е. (p<0,05).

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать эффективность фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200, за счет стимуляции неоваскулогенеза. Кроме того, заявленный способ фармакологической коррекции ишемии конечности позволяет исключить побочные эффекты, так как применяемый фармакологический агент относится к классу препаратов сверхмалых доз антител.

Формула изобретения

Способ фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений у экспериментального лабораторного животного с экспериментальной ишемией конечности, отличающийся тем, что в эксперименте лабораторному животному ежедневно, в течение 28 дней после моделирования ишемии, два раза в сутки, внутрижелудочно вводят смесь растворов гомеопатических разведений моноклональных антител к VEGF - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут).

ИЗВЕЩЕНИЯ

MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 11.02.2017

Дата внесения записи в Государственный реестр: 23.10.2017

Дата публикации и номер бюллетеня: 23.10.2017 Бюл. №30