РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ |
(19)
RU
(11)
(13)
C1
|
|||||
|
||||||
| Статус: | не действует (последнее изменение статуса: 02.07.2021) |
| Пошлина: | учтена за 8 год с 26.02.2016 по 25.02.2017. Возможность восстановления: нет. |
|
(21)(22) Заявка: 2009106630/15, 25.02.2009 (24) Дата начала отсчета срока действия патента: (45) Опубликовано: 10.10.2010 Бюл. № 28 (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: КЛЕНОВА И.Ф. И ДР.Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. т.1. - М.: Сельхозиздат, 2004., с.215. RU 2239425 С1, 10.11.2004. RU 1755437 С, 09.06.1995. RU 2026082 С1, 09.01.1995. Адрес для переписки: |
(72) Автор(ы):
(73) Патентообладатель(и):
|
(54) ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА У МОЛОДНЯКА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ
(57) Реферат:
Изобретение относится к области ветеринарии. Препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных содержит, мас.%: колистина сульфат - 4,0-6,0; тилозин основание - 4,0-6,0; пиросульфит натрия - 0,32; спирт бензиловый - 4,0; вода для инъекций - 15,0; 1,2-пропиленгликоль - до 100,0. Использование препарата позволяет повысить эффективность лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных. 14 табл.
Изобретение относится к области ветеринарии.
Ущерб, причиняемый сальмонеллезами, складывается из убытков, причиняемых падежом молодняка, отставанием в росте и развитии переболевших животных, а также из расходов, связанных с организацией профилактических и лечебных мероприятий. Летальность при сальмонеллезе молодняка достигает 40-50%. Сальмонеллез отличает множество форм течения, и кроме носительства у животных отмечают дифтеритические колиты (диареи различных степеней тяжести), артриты и пневмонии (при хроническом течении), сепсис, аборты, менингоэнцефалиты, пищевые токсикоинфекции и реже другие патологии. Довольно часто сальмонеллез протекает совместно с другими бактериальными и инвазионными (колибактериоз, псевдомоноз, дизентерия, пастереллез, диплококкоз, клостридиоз, бордетеллез, балантидиоз, аскаридоз, трихоцефалез, криптоспоридиоз) и некоторыми другими заболеваниями [Ефанова Л.И. Диагностика наиболее распространенных инфекционных болезней телят и поросят. - Воронеж: ВГАУ, 1995. - 128 с.; Карева Э.П., Солдатенко Н.А., Зимина В.Н. Особенности эпизоотологии сальмонеллеза свиней // Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных, Воронеж, 1999. - С.472-474].
Успех борьбы с инфекционными заболеваниями, в том числе с сальмонеллезом, во многом зависит от правильно выбранной схемы лечения. Широкое внедрение в практику животноводческих хозяйств антибактериальных препаратов в начальный период их применения создало иллюзию решения проблемы бактериальных инфекций. Однако эффективность многих антибиотиков, как и других антибактериальных препаратов, резко снижается из-за широкого распространения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов.
Проблема резистентности микроорганизмов к различным антибактериальным препаратам проявилась вскоре после начала их широкого применения в клинической практике. В связи с чем актуальность проблемы терапии инфекционных болезней, вызванных полирезистентными штаммами бактерий, не вызывает сомнения. Возможными путями ее решения может явиться либо синтез новых антибактериальных средств, либо оптимизация применения имеющихся на вооружении препаратов [Ефанова Л.И. Некоторые экологические аспекты применения антибиотиков в ветеринаринарной практике // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных: тез. докл. - Воронеж, 1997. - С.307-308. Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г.Шахов // Ветеринарный консультант. - 2003. - №1. - С.4-5].
Нередко комплекс антибактериальных веществ обладает синергидным эффектом, что позволяет снизить дозу препарата или разработать более удобную схему лечения, уменьшив тем самым риск возникновения побочных эффектов.
Известен препарат для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка животных, следующего состава, мас.%: гидросульфат поливинилэтинилтриметилпиперидола 0,8-1,2; йод 0,1-0,3; йодид калия 0,3-1,0; полимиксин 0,02-0,04; дистиллированная вода - остальное. Поросятам препарат вводится внутрь в дозе 1 мл на 1 кг массы тела двукратно в сутки в течение 3-4 дней [RU 2054941 C1, 27.02.1994].
Известно средство для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка животных - препарат «Рифапол», который содержит, мас.%: полимиксин 0,6-0,9, рафампицин 10,0-15,0. Препарат вводят внутрь два раза в сутки в течение 2-4 дней в дозе 1 мл/кг массы животного [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1. / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов.- М.: Сельхозиздат, 2004. - С.213].
Известно средство для лечения желудочно-кишечных болезней сельскохозяйственных животных "Энроколи". Производитель «Энроколи» - испанская фирма СП «Ветеринария СА». Препарат содержит: энрофлоксацин - 10,0% и различное содержание колистина - от 50,0 млн. ИЕ и выше [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1 / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов.- М.: Сельхозиздат, 2004. - С.209].
Известен препарат «Тилозин 50 раствор для инъекций», представляющий собой прозрачный раствор желтого цвета, 1 мл которого содержит 50 мг тилозина в форме основания [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1. / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М.: Сельхозиздат, 2004. - С.183].
Известный препарат не всегда достаточно эффективен и приводит к полному выздоровлению всех больных животных, ввиду того, что он проявляет активность главным образом в отношении грамположительных и некоторых грамотрицательных микроорганизмов.
Прототипом изобретения является порошок для орального применения «Ровастин» для лечения и профилактики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц, возбудители которых чувствительны к колистину и спирамицину, представляющий собой белый, рыхлый, горьковатого вкуса порошок, хорошо растворимый в воде с содержанием в 100 г: колистина 50 млн. ЕД, спирамицина 65 млн. ЕД и глюкозы до 100 г. Препарат назначают перорально, индивидуально или групповым методом, с кормом или питьевой водой. Птице препарат назначают из расчета 0,5-1 г на 1 л воды ежедневно, в течение 2-5 дней. Животным назначают в дозе 1-2 г на 10 кг массы тела, один раз в день, ежедневно в течение 2-5 дней [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1 / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М.: Сельхозиздат, 2004. - С.215].
Однако применение этих препаратов не всегда приводит к положительным результатам при лечении сальмонеллеза. При пероральном применении препаратов при лечении сальмонеллеза предпочтительно использование активнодействующих веществ с хорошей биодоступностью. Колистин же практически не всасывается из желудочно-кишечного тракта. Концентрация в сыворотке крови составляет 2-3% от введенной дозы. С другой стороны, фармакодинамический спектр изменений, естественно, является более выраженным при парентеральных путях введения, а данные препараты задаются больным животным с кормом или с питьем.
Технический результат - повышение эффективности лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных.
Технический результат достигается использованием препарата, состоящего из следующих компонентов мас.%:
Колистина сульфат - 4,0-6,0;
Тилозин основание - 4,0-6,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Спирт бензиловый - 4,0;
Вода для инъекций - 15,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Оптимальным является следующее соотношение компонентов, мас.%:
Колистина сульфат - 5,0;
Тилозин основание - 5,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Спирт бензиловый - 4,0;
Вода для инъекций - 15,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Основной целью сочетанного применения колистина и тилозина, является расширение спектра антибактериального действия, восполнение пробелов в спектре каждого из компонентов комбинации и предупреждение формирования устойчивости микроорганизмов.
Сочетанное применение тилозина и колистина обеспечивает повышение эффективности лечения сальмонеллеза, быстрое выздоровление больных животных, снижение расхода активнодействующих веществ и их побочного действия на организм.
Колистина сульфат (полимиксин Е) представляет собой полимиксин, производимый Bacillus polymyxa. Полимиксин Е активен в отношении сальмонелл, кишечной палочки, псевдомонад, шигелл, гемофилюс, аэробактерий, пастерелл, бордетелл, клебсиелл [British Pharmacopoiea, 2007, v.I & II, P.448; David Bernala, J.M.Llop, E.Fort, M.B.Badia, R.Jadar. Use colistin in the Treatment of Multie-Drug-Resistant Gram-Negative Infections / Am.J. health-Syst Pharm, 2005; 62(1): 39-47].
Механизм действия заключается в бактерицидном действии на цитоплазматическую мембрану бактериальной клетки, взаимодействуя с фосфолипидами. Они связываются с анионными участками мембраны и по характеру действия напоминают катионные детергенты. Повреждение структуры мембраны приводит к изменению ее проницаемости как для внутри- так и внеклеточных компонентов [Fernandes-Viladrich P., Corbella X., Corral L. et al. Successful treatment of ventriculitis due to carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii with intraventricular colistin sulfomethat sodium. Clinical Infect. Dis., 1999; 28:916-7].
Тилозин основание - антибиотик из группы макролидов, продуцентом которого является Streptomyces Fradiae. Основу его химической структуры составляет макроциклическое лактоновое кольцо с одним или несколькими углеводными остатками [Дорожкин В.И., Бирюкова Н.П., Антипов В.А. Апробация антимикробных средств на основе тилозина // Сб. науч. тр. ВНИВИПФиТ «Использование новых методов диагностики и фармакологических средств в лечении и профилактике незаразных болезней животных». Воронеж, 1993. - С.26-30; Ключников С.О., Болдырев В.Б. Возможности применения макролидов у детей в современных условиях / Вестник педиатрической фармакологии и нутрициологии / Том 4, №3, 2007. - С.16-23; British Pharmacopoiea, 2007 (Vet.), p.58].
Одним из общих свойств макролидов является бактериостатическое действие, которое обусловлено нарушением синтеза белка в микробной клетке путем необратимого связывания с 5OS-субъединицей рибосомы [Ключников С.О., Болдырев В.Б. Возможности применения макролидов у детей в современных условиях / Вестник педиатрической фармакологии и нутрициологии / Том 4, №3, 2007. - С.16-23].
Для макролидов характерен постантибиотический эффект, проявляющийся в отсутствии эффекта возобновления роста бактерий, несмотря на выведение антибиотика из организма [Ключников С.О., Болдырев В.Б. Возможности применения макролидов у детей в современных условиях / Вестник педиатрической фармакологии и нутрициологии / Том 4, №3, 2007. - С.16-23], противовоспалительном и иммуномодулирующем действии. Они повышают активность Т-киллеров, накапливаются в нейтрофилах и макрофагах, усиливают их фагоцитарную активность и миграцию в очаг воспаления.
Тилозина основание подавляет размножение и развитие грамположительных бактерий (стрептококков, стафилококков, пневмококков, коринебактерий, клостридий, эризипелотриксов), грамотрицательных (пастерелл, гемофилюс, бруцелл), микоплазм, простейших вибрионов, лептоспир, нейсерий, спирохет, риккетсий, хламидий группы пситтакоза [Дорожкин В.И., Бирюкова Н.П., Антипов В.А. Апробация антимикробных средств на основе тилозина // Сб. науч. тр. ВНИВИПФиТ «Использование новых методов диагностики и фармакологических средств в лечении и профилактике незаразных болезней животных». Воронеж, 1993. - С.26-30; Сазонова Е.М., Выдуйкина А.П., Крутляк Е.Б. и др. Получение рабочего стандартного образца тилозина // Сб-к науч. тр. ВГНКИ, М., 1994, т.56. - С.104-109].
Именно такое сочетание активнодействующих веществ расширяет спектр антибактериального действия препарата, предупреждает развитие резистентности микроорганизмов.
Пиросульфит натрия - белый кристаллический порошок с сильным запахом сернистого ангидрида, хорошо растворимый в воде. Применяется в качестве стабилизатора [British Pharmacopoiea, 2007, v.I & II, р.1520].
Спирт бензиловый - химическая формула С6Н5СН2ОН. Представляет собой бесцветную жидкость со слабым ароматическим запахом, растворимую во всех обычных органических растворителях, за исключением петролейного эфира. 4 части бензилового спирта растворяются в 100 частях воды. Применяется в качестве растворителя, фиксатора запаха в парфюмерии, консерванта[Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т. Органический анализ: Пер. с нем. - Л.: Химия, 1981. - С.61; British Pharmacopoiea, 2007, v.I & II, р.171].
Воду для инъекций получают дистилляцией или осмосом. Вода получается апирогенной, не содержит антимикробных веществ и других добавок, максимально допустимый уровень содержания бактериальных эндотоксинов 0,25 Едэ/мл [Фармакопейная статья ФС 42-2620-97, Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации, Фармакопейный государственный комитет, утверждена 11.03.97. - 4 с.].
1,2-Пропиленгликоль - химическая формула СН3СНОНСН2ОН. Представляет собой прозрачное, бесцветное, без запаха, вязкое со сладковатым вкусом вещество, растворимое в воде, спирте и хлороформе [British Pharmacopoiea, 2007, v.I & II, P.1392; Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т. Органический анализ: Пер. с нем. - Л.: Химия, 1981. - С.68-69].
Препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных перед применением подогревают до 37-38°С. Препарат вводят внутримышечно ежедневно один раз в сутки в дозе 0,05 мл/кг массы тела (телята) и 0,075 мл/кг (поросята) в течение 3-5 дней, при тяжелом течении болезни - в течение 5-7 дней.
Телятам не рекомендуется вводить в одно место более 5 мл, поросятам - более 2,5 мл препарата. При введении больших объемов дозу разделяют и вводят в разные места. При повторных инъекциях рекомендуется менять место инъекций.
В рекомендуемых дозах препарат не вызывает побочных явлений и осложнений. После инъекций препарата у животных может отмечаться кратковременная болевая реакция и беспокойство.
Препарат противопоказан при повышенной чувствительности животных к колистину и тилозину. Убой животных на мясо разрешается не ранее чем через 10 суток после последнего введения препарата. Мясо животных, вынуждено убитых до истечения указанного срока, может быть использовано для кормления плотоядных животных или для производства мясокостной муки.
Изготавливается препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных следующим образом. Пропиленгликоль нагревают в реакторе с контактным термометром и контурным отоплением и охлаждением до температуры 50±5°С. Затем в реактор вносят последовательно, с интервалом в 10 минут, тилозин основание, колистина сульфат, пиросульфит натрия, бензиловый спирт, воду для инъекций. Смешивание проводят при температуре 40±5°С до полного растворения компонентов. Фасовка препарата проводится в боксе, предварительно обработанном в течение 1 часа бактерицидной лампой. Ампулы запаивают, флаконы закрываются резиновой пробкой и герметизируются алюминиевыми колпачками. В процессе фасовки проводится промежуточный контроль на наличие механических включений (визуально невооруженным глазом на черном и белом фонах) и на объем заполнения ампул и флаконов (с помощью калиброванного шприца или цилиндра). Контроль объема заполнения проводится с интервалом: при расфасовке 100-50 мл - через каждые 200 единиц фасовки, при расфасовке 20-10 мл - через каждые 300 единиц фасовки, при расфасовке в ампулы - через каждые 500 единиц фасовки. Объем заполнения флаконов должен быть не менее номинального.
Сущность технического решения поясняется примерами.
Пример 1. Определение оптимального соотношения компонентов в препарате для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных, изучение его антимикробных свойств.
Изучены антимикробные свойства препарата. Выявлено оптимальное количественное содержание тилозина и колистина в опытах in vitro и in vivo. В модельных опытах установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия в отношении испытанных культур микроорганизмов.
Опыты in vitro
Изучение антимикробной активности и соотношения колистина и тилозина в препарате для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных проводилось in vitro методом серийных разведений. В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят и телят, типированные по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам. Соотношение колистина и тилозина в препарате для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных в следующих комбинациях.
Комбинация 1. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 5,0;
Тилозин основание - 5,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Комбинация 2. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 4,5;
Тилозин основание - 5,5;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Комбинация 3. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 5,5;
Тилозин основание - 4,5;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Комбинация 4. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 4,0;
Тилозин основание - 6,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Комбинация 5. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 6,0;
Тилозин основание - 4,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Антимикробную активность различных комбинаций состава препарата сравнивали с антимикробной активностью колистина и тилозина.
Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясо-пептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию - путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарата. В качестве жидкой питательной среды применяли мясо-пептонный бульон.
Основной раствор препарата (1000 мкг/мл) готовили с учетом плотности препарата. Из основного раствора препарата готовили рабочий раствор. Далее в 16 стерильных пробирок разливали по 4,5 мл мясо-пептонного бульона. В 1 пробирку добавляли 4,5 мл препарата, перемешивали, после чего 4,5 мл полученного раствора переносили в следующую пробирку, продолжая, таким образом, разведение до 15 пробирки. В качестве контроля роста культуры использовали 16 пробирку, не содержащую препарата.
Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 500 тысяч.
Посевы инкубировали при 37°С в течение 18-20 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.
Результаты изучения антимикробной активности колистина, тилозина и различных комбинаций представлены в таблице 1.
Как видно из представленных данных, препарат обладает высоким антибактериальным действием в отношении основных возбудителей, вызывающих сальмонеллез у молодняка сельскохозяйственных животных. В зависимости от штамма минимальная бактериостатическая концентрация (МБсК) в отношении сальмонелл составила для колистина 0,78-3,12 мкг/мл, для тилозина 6,25 мкг/мл.
| Таблица 1 | |||||
| Антимикробная активность (МБсК) колистина, тилозина и различных композиций препарата, мкг/мл | |||||
| Композиция | К | Т | По Σ ДВ | В пересчете на | |
| К | Т | ||||
| S. dublin 593/75 | |||||
| К1 | 0,78 | 6,25 | 0,78 | 0,390 | 0,390 |
| К2 | 0,78 | 0,351 | 0,429 | ||
| К3 | 0,78 | 0,429 | 0,351 | ||
| К4 | 0,78 | 0,312 | 0,468 | ||
| К5 | 0,78 | 0,468 | 0,312 | ||
| S.cholerae suis | |||||
| К1 | 3,12 | 6,25 | 0,39 | 0,195 | 0,195 |
| К2 | 1,56 | 0,702 | 0,858 | ||
| К3 | 0,39 | 0,215 | 0,175 | ||
| К4 | 1,56 | 0,624 | 0,936 | ||
| К5 | 1,56 | 0,936 | 0,624 | ||
| Обозначения: К - колистин; Т - тилозин; К1 - композиция 1; К2 - композиция 2; К3 - композиция 3; К4 - композиция 4; К5 - композиция 5 | |||||
В отношении S. dublin антимикробная активность всех изученных композиций по абсолютной массе по сравнению с колистином не изменилась, а по сравнению с тилозином увеличилась в 8 раз. В то же время совместное применение колистина и тилозина позволило снизить МБсК композиций 1-5 в отношении данной культуры для колистина до 0,390, 0,351, 0,429, 0,312 и 0,468 мкг/мл (в 1,7-2,5), а для тилозина МБсК снизилась в 16,0, 14,7, 17,8, 13,4 и 20,0 раз соответственно.
В отношении S. cholerae suis антимикробная активность композиций 1 и 3 по абсолютной массе увеличилась по сравнению с колистином в 8 раз, а по сравнению с тилозином в 16 раз, композиций 2, 4 и 5 - в 2 и 4 раза соответственно. В то же время совместное применение колистина и тилозина позволило снизить МБсК в отношении данной культуры в значительной степени как для колистина, так и для тилозина у композиций 1 и 3. По колистину - до 0,195 и 0,215 мкг/мл, а по тилозину - до 0,195 и 0,175 мкг/мл, что выше, чем у колистина в 16,0-14,5 раз и у тилозина - в 32,0-35,7 раза. Для композиции 2 МБсК снизилась для колистина до 0,702 мкг/мл (в 4,4 раза) и для тилозина до 0,858 мкг/мл (в 7,3 раза); в композиции 4 - у колистина до 0,624 мкг/мл (в 5 раз), а у тилозина - до 0,936 мкг/мл (в 6,7 раза); в композиции 5 - у колистина - до 0,936 мкг/мл (в 3,3 раза), у тилозина - до 0,624 мкг/мл (в 10 раз).
Таким образом, изучение антимикробной активности различных композиций препарата и отдельных компонентов показало наличие взаимоусиливающего (синергидного) действия в отношении изученных патогенных культур. В опытах in vitro установлено, что наиболее активной композицией можно считать комбинацию 1.
1.2. Изучение оптимального соотношения колистина и тилозина в опытах in vivo
С учетом полученных результатов в опытах in vitro в опытах in vivo испытаны 3 композиции. Определение их эффективности проводили в модельных опытах при экспериментальном заражении белых мышей Salmonella cholerae suis (2,0 млн м.к./мышь), Salmonella dublin (2,5 млн м.к./мышь).
Эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г разведения вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии. Животные содержались в условиях вивария при 20-22°С и влажности 40-60%. Содержание животных и обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям Международной конвенции.
Группы животных формировали по принципу аналогов по 8 голов в каждой, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Животные контрольных групп лечению не подвергались. За подопытными животными вели клиническое наблюдение в течение 15 дней, учитывали заболеваемость, гибель, сроки выздоровления. Специфичность гибели определяли бактериологическим методом выделения исходных культур микроорганизмов.
Заражение животных проводили внутрибрюшинно смывом суточных агаровых культур возбудителей. Разведения культур делали на стерильном физиологическом растворе. Концентрацию микробных клеток определяли по стандарту мутности. В предварительных опытах была определена DLM экспериментальных культур, которая составила для Salmonella cholerae suis 2 млн.м.к., Salmonella dublin 2,5 млн.м.к.
С профилактической целью препарат вводили однократно одновременно с заражением в дозе 0,075 мл/кг. Лечение мышей начинали через 6 часов после заражения. Препарат вводили один раз в сутки внутримышечно в той же дозе.
О профилактической эффективности препарата судили по количеству выживших мышей после окончания опыта и числу мыше-дней для каждой группы через 15 дней после инфицирования.
При экспериментальном заражении мышей Salmonella cholerae suis однократная инъекция композиции 1 в дозе 0,075 мл/кг обеспечила сохранность животных в пределах 62,5% при 100,0% гибели животных контрольной группы (таблица 2). Профилактическая эффективность данной композиции при заражении белых мышей Salmonella dublin была ниже на 12,5%.
| Таблица 2 | |||||
| Профилактическая эффективность различных композиций препарата при экспериментальном заражении белых мышей | |||||
| Группа | Кол-во мышей в группе, гол. | Пало, гол | Выжило | Мыше-дни жизни | |
| гол | % | ||||
| Salmonella cholerae suis (2 млн.м.к.) | |||||
| Контроль | 8 | 8 | 0 | 0 | 26 |
| Комбинация 1 | 8 | 3 | 5 | 62,5 | 84 |
| Комбинация 2 | 8 | 5 | 3 | 37,5 | 68 |
| Комбинация 3 | 8 | 4 | 4 | 50,0 | 80 |
| Salmonella dublin (2,5 млн.м.к.) | |||||
| Контроль | 8 | 8 | 0 | 0 | 25 |
| Комбинация 1 | 8 | 4 | 4 | 50,0 | 75 |
| Комбинация 2 | 8 | 6 | 2 | 25,0 | 54 |
| Комбинация 3 | 8 | 5 | 3 | 37,5 | 69 |
При экспериментальном заражении мышей Salmonella cholerae suis однократная инъекция композиции 3 в дозе 0,075 мл/кг обеспечила сохранность животных в пределах 50,0% при 100,0% гибели животных контрольной группы. Профилактическая эффективность данной композиции при заражении белых мышей Salmonella dublin была ниже на 12,5%.
При применении композиции 2 профилактическая эффективность была ниже на 25,0%, чем при применении композиции 1 и на 12,5%, чем при применении композиции 3.
Также отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни белых мышей в зависимости от микроорганизма-возбудителя и применяемой композиции. При инфекциях, вызванных сальмонеллами, суммарная продолжительность жизни белых мышей составила 80-84 дней (Salmonella cholerae suis) и 69-74 дня (Salmonella dublin) при применении комбинаций 1 и 3. Суммарная продолжительность жизни мышей при применении композиции 2 была ниже при всех видах инфекций и составила в среднем 61 день. Таким образом, и по данному показателю наиболее высокие результаты отмечены у композиций 1 и 3.
О терапевтической эффективности препарата судили по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мыше-дней для каждой группы через 15 дней после инфицирования.
При экспериментальном заражении мышей Salmonella cholerae suis лечение животных композициями 1 и 3 в дозе 0,075 мл/кг обеспечило сохранность животных в пределах 75,0% при 100,0% гибели животных контрольной группы (таблица 3).
| Таблица 3 | ||||||
| Терапевтическая эффективность различных композиций препарата при экспериментальном заражении белых мышей | ||||||
| Группа | Кол-во мышей в группе, голов | Пало, голов | Выжило | Мыше-дни жизни | ||
| голов | % | |||||
| Salmonella cholerae suis (2 млн.м.к.) | ||||||
| Контроль | 8 | 8 | 0 | 0 | 26 | |
| Комбинация 1 | 8 | 2 | 6 | 75,0 | 99 | |
| Комбинация 2 | 8 | 3 | 5 | 62,5 | 86 | |
| Комбинация 3 | 8 | 2 | 6 | 75,0 | 98 | |
| Salmonella dublin (2,5 млн.м.к.) | ||||||
| Контроль | 8 | 8 | 0 | 0 | 25 | |
| Комбинация 1 | 8 | 3 | 5 | 62,5 | 95 | |
| Комбинация 2 | 8 | 4 | 4 | 50,0 | 76 | |
| Комбинация 3 | 8 | 3 | 5 | 62,5 | 86 | |
Эффективность данной композиции при лечении белых мышей, зараженных Salmonella dublin, была ниже на 12,5% по сравнению с таковой при сальмонеллезной инфекции, вызванной Salmonella cholerae suis.
При применении композиции 2 при всех видах инфекций эффективность лечения была ниже на 12,5%, чем при применении композиций 1 и 3.
Также отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни белых мышей в зависимости от микроорганизма-возбудителя и применяемой композиции. При инфекциях, вызванных сальмонеллами, суммарная продолжительность жизни белых мышей составила 86 - 99 дней. Таким образом, и по данному показателю наиболее высокие результаты отмечены у композиций 1 и 3.
Суммируя данные опытов in vitro и in vivo, установлено, что наиболее эффективной оказалась композиция 1.
В связи с этим более детально была изучена антимикробная активность препарата. Результаты опыта представлены в таблице 4.
Согласно данным, представленным в таблице 4, препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает выраженными антимикробными свойствами. Минимальное ингибирующее действие препарата для лечения сальмонеллеза молодняка сельскохозяйственных животных в отношении музейных штаммов сальмонелл установлено в концентрации 0,39-1,56 мкг/мл, а в отношении полевых 1,56-3,12 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое в 2 раза.
| Таблица 4 | ||
| Антимикробная активность препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных | ||
| Культура микроорганизмов | Препарат | |
| МБсК, мкг/мл | МБцК, мкг/мл | |
| S.cholerae suis | 0,39 | 0,78 |
| S.cholerae suis (п) | 1,56 | 3,12 |
| S.dublin 593/75 | 0,78 | 1,56 |
| S.dublin | 1,56 | 3,12 |
| S.thyphimurium | 3,12 | 6,25 |
| S.thyphimurium 383/144 | 1,56 | 3,12 |
Проведенные исследования показали, что препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.
В результате изучения антимикробного действия тилозина в сочетании с колистином в опытах in vivo и in vitro установлено, что эти препараты обладают взаимоусиливающим действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов. Использование комплексов тилозина и колистина обеспечило сохранность животных при лечении от 62,5 до 75,0%, а при профилактике 50,0-62,5%, в зависимости от микроорганизма-возбудителя.
Пример 2. Определение оптимальной терапевтической композиции препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных.
Отработка оптимальной терапевтической композиции препарата проводилась в опытах на 4 группах телят, больных сальмонеллезом. Животные в группах подбирались по принципу аналогов.
Диагноз на заболевание сальмонеллеза устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, патологоанатомического вскрытия, лабораторных исследований с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.
Телят контрольной группы лечили энроксилом 5% производства фирмы «KRKA» (Словения) [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1 / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М.: Сельхозиздат, 2004. - С.226-227], который вводили подкожно в дозе 1 мл/20 кг массы тела 1 раз в сутки в течение 5 дней.
Животным опытных групп для лечения применяли следующие композиции препарата.
Комбинация 1. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 5,0;
Тилозин основание - 5,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Комбинация 4. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 4,0;
Тилозин основание - 6,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Комбинация 5. Состав препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных; компоненты, мас.%:
Колистина сульфат - 6,0;
Тилозин основание - 4,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных применяли внутримышечно в дозе 0,05 мл/кг массы тела пятикратно с интервалом 24 часа.
Лечебную эффективность различных композиций препарата оценивали по количеству выздоровевших телят в течениие10 дней со дня начала курса лечения (таблица 5).
| Таблица 5 | ||||
| Отработка оптимальной терапевтической композиции препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных | ||||
| Показатели | Группа животных | |||
| Контроль | К1 | К4 | К5 | |
| Количество животных, голов | 25 | 25 | 25 | 25 |
| Продолжительность лечения, дни | 5,7±0,5 | 3,9±0,4 | 4,1±0,3 | 5,1±0,4 |
| Выздоровело, голов | 20 | 23 | 23 | 22 |
| % | 80,0 | 92,0 | 92,0 | 88,0 |
| Пало, голов | 1 | - | - | 1 |
| % | 4,0 | - | - | 4,0 |
| Лечебная эффективность, % | 80,0 | 92,0 | 92,0 | 88,0 |
| Примечание: К1 - композиция 1; К4 - композиция 4; К5 - композиция 5. | ||||
В контрольной группе исчезновение клинических признаков заболевания наступало в среднем на 6 день лечения и отмечено у 20 телят, что составило 80,0%.
В первой опытной группе, где применяли композицию 1 в дозе 0,05 мл/кг один раз в сутки, исчезновение клинических признаков заболевания наступало на 3-4 день лечения и отмечено у 23 телят, что составило 92,0%.
Во второй опытной группе, где применяли композицию 4 в дозе 0,05 мл/кг один раз в сутки, исчезновение клинических признаков заболевания наступало в среднем на 4 сутки лечения и отмечено у 23 телят, что составило 92,0%.
В третьей опытной группе, где применяли композицию 5 в дозе 0,05 мл/кг один раз в сутки, исчезновение клинических признаков заболевания наступало на 4-5 сутки лечения и отмечено у 22 голов, что составило 88,0%.
Как видно из представленных данных (таблица 5) композиции 1 и 4 в дозе 0,05 мл/кг обладают значительным терапевтическим эффектом, количество выздоровевших животных составило 92,0%, что на 12,0% выше контроля.
При применении композиции 5 лечебный эффект увеличивается по сравнению с контрольной группой на 8,0%, а по сравнению композициями 1 и 4 ниже на 4,0%.
В то же время, исчезновение клинических признаков заболевания наступало раньше в группе животных, которых лечили композицией 1, что говорит об экономической обоснованности применения препарата в дозе 0,05 мл/кг массы тела с интервалом 24 часа.
Таким образом, установлено, что оптимальной терапевтической композицией препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных, является состав №1.
Пример 3. Изучение эффективности лечения сальмонеллеза у телят.
Изучение проведено в трех опытах на телятах 1-3-месячного возраста, больных сальмонеллезом. По принципу парных аналогов с учетом общего состояния и тяжести заболевания больные телята были распределены в две группы (контроль, опыт). Диагноз на заболевание сальмонеллезом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, бактериологического исследования (при бактериологическом исследовании фекалий были выделены и изучены культуры Salmonella typhimurium и Salmonella dublin), патологоанатомического вскрытия, с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.
За животными вели ежедневное клиническое наблюдение в течение 10-15 дней, при этом учитывали общее состояние, падеж, скорость роста, сроки выздоровления.
В опытах №1 и 2 телят контрольной группы лечили энроксилом 5% производства фирмы «KRKA» (Словения) [Ветеринарные препараты в России: Справочник в 2 томах. Т.1 / И.Ф.Кленова, К.Л.Мальцев, Н.А.Яременко, И.А.Архипов. - М.: Сельхозиздат, 2004. - С.226-227], который вводили подкожно в дозе 1 мл/20 кг массы тела 1 раз в сутки в течение 3-5 дней. В третьем опыте телят контрольной группы лечили раствором гентамицина сульфата 4%, который вводили внутримышечно в дозе 3 мг/кг живой массы два раза в сутки в течение 3-5 дней.
Животным опытной группы для лечения применяли препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Колистина сульфат - 5,0;
Тилозин основание - 5,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных применяли внутримышечно в дозе 0,05 мл/кг массы тела трехкратно с интервалом 24 часа. При тяжелом течении болезни проводили четыре-пять инъекций с интервалом 24 часа.
Первый опыт по изучению эффективности лечения колибактериоза телят проведен на комплексе по производству молока СП «Сабурово» ОАО АПК «Орловская Нива» Орловского района Орловской области в ноябре 2007 - январе 2008 года.
У больных наблюдалось угнетение, тахикардия (107±3,5 уд. в минуту), снижение аппетита и среднесуточных привесов (с 880 до 562 г), температура тела в начале болезни была 39,9±0,4°С. Диарея наблюдалась у 55% животных, при этом фекалии были с большим содержанием слизи, а у некоторых, кроме того, отмечалось наличие крови. У 73% больных была одышка, серозные или серозно-гнойные истечения из носа. При патологоанатомическом вскрытии у 96,5% больных отмечался геморрагический энтерит, у 7% - фибринозный колит и у 3% - язвенный абомазит. Брыжеечные, бронхиальные и медиастинальные лимфатические узлы увеличены, на разрезе сочные, структура не изменена. Печень дряблая, глинистого цвета с множественными очагами серого цвета. Легкие вишнево-красного цвета с участками уплотнения, а у некоторых в толще легочной ткани наблюдались абсцессы.
Результаты терапевтической эффективности препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных представлены в таблице 6.
| Таблица 6 | ||
| Терапевтическая эффективность препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных в СП «Сабурово» ОАО АПК «Орловская Нива» Орловского района Орловской области | ||
| Показатели | Группа животных | |
| контрольная | опытная | |
| Кол-во животных, голов | 60 | 65 |
| Выздоровело, голов | 47 | 61 |
| % | 78,3 | 93,8 |
| Пало, голов | 4 | 0 |
| % | 6,7 | 0 |
| Переход в хроническую форму, смена лечения, голов | 9 | 4 |
| % | 15,0 | 6,2 |
| Сроки выздоровления, дней | 5,5±1,0 | 3,7±0,5 |
Из данных таблицы 6 видно, что терапевтический эффект в контрольной группе составил 78,3%, летальность 6,7%. Среди телят из опытной группы эффективность лечения достигла 93,8%, а падежа животных не было отмечено.
Второй опыт по изучению эффективности лечения сальмонеллеза телят проведен в СХА «Заря» Павловского района Воронежской области в январе - марте 2008 года.
Результаты терапевтической эффективности препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных представлены в таблице 7.
| Таблица 7 | ||
| Терапевтическая эффективность препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных в СХА «Заря» Павловского района Воронежской области | ||
| Показатели | Группа животных | |
| Контроль | Опыт | |
| Кол-во животных, голов | 59 | 64 |
| Выздоровело, голов | 48 | 56 |
| % | 81,4 | 87,5 |
| Пало, голов | 2 | 0 |
| % | 3,4 | 0 |
| Остались больными, голов | 9 | 8 |
| % | 15,2 | 12,5 |
| Сроки выздоровления, дней | 5,2±0,5 | 4,5±0,2 |
| Терапевтическая эффективность, % | 81,4 | 87,5 |
Из данных таблицы 7 видно, что терапевтический эффект в контрольной группе составил 81,4%, летальность 3,4%. Среди телят из опытной группы эффективность лечения достигла 87,5%, а падежа животных не было отмечено. По сравнению с телятами контрольной группы при применении препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных уменьшился срок выздоровления телят на 13,5%.
Третий опыт по изучению эффективности парентерального применения препарата для лечения сальмонеллеза у телят проведен в ООО «А/ф Настюша-Грязи» Грязинского района Липецкой области в феврале-марте 2008 года (таблица 8).
| Таблица 8 | ||
| Терапевтическая эффективность препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных | ||
| Показатели | Группа животных | |
| Контроль | Опыт | |
| Кол-во животных, голов | 47 | 47 |
| Выздоровело, голов | 41 | 43 |
| % | 87,2 | 91,5 |
| Пало, голов | 3 | 0 |
| % | 6,4 | 0 |
| Остались больными, голов | 3 | 4 |
| % | 6,4 | 8,5 |
| Сроки выздоровления, дней | 5,7±0,7 | 4,2±0,5 |
| Терапевтическая эффективность, % | 87,2 | 91,5 |
Проведенные исследования показали, что препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении сальмонеллеза у телят (в среднем она составила 90,9%), что на 8,6% выше эффективности энроксила 5%, и на 4,3% выше раствора гентамицина сульфата 4% (третий опыт). По сравнению с контрольными группами при применении препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных падежа животных не отмечалось, уменьшился срок выздоровления в среднем на 24,2%.
Пример 4. Изучение эффективности лечения сальмонеллеза у поросят.
Изучение проведено в трех опытах на поросятах 30-35-дневного возраста. По принципу парных аналогов животные были разделены на две группы с учетом общего состояния и тяжести заболевания и находящихся в одинаковых условиях кормления и содержания.
Диагноз на заболевание колибактериозом устанавливали комплексно на основании данных клинического обследования животных, результатов бактериологического исследования (при бактериологическом исследовании фекалий были выделены и изучены культуры Salmonella typhimurium и Salmonella cholerae suis), патологоанатомического вскрытия с учетом эпизоотической ситуации в хозяйстве.
За животными вели ежедневное клиническое наблюдение в течение 15 дней, при этом учитывали общее состояние, падеж, скорость роста, сроки выздоровления.
Поросят контрольной группы лечили энроксилом 5% производства фирмы «KRKA» (Словения), который вводили подкожно в дозе 1 мл/20 кг массы тела 1 раз в сутки в течение 3-5 дней.
Животным опытной группы для лечения применяли препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Колистина сульфат - 5,0;
Тилозин основание - 5,0;
Пиросульфит натрия - 0,32;
Вода для инъекций - 15,0;
Спирт бензиловый - 4,0;
1,2-Пропиленгликоль - до 100,0%.
Препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных применяли внутримышечно в дозе 0,075 мл/кг массы тела трехкратно с интервалом 24 часа. При тяжелом течении болезни проводили четыре-пять инъекций с интервалом 24 часа.
Первый опыт по изучению эффективности лечения сальмонеллеза поросят проведен в ООО «им. М.Горького» отд. Возрождение» Грязинского района Липецкой области в октябре-декабре 2007 года. Второй опыт проведен в КФХ «Ротарь» Острогожского района Воронежской области в январе-феврале 2008 года. Третий опыт проведен в ИП «Сорокина О.В.» Таловского района Воронежской области в феврале-марте 2008 года.
Результаты опытов по изучению эффективности лечения сальмонеллеза у поросят представлены в таблицах 9-11.
| Таблица 9 | ||
| Эффективность лечения сальмонеллеза у поросят в ООО «им. М.Горького» отд. Возрождение» Грязинского района Липецкой области | ||
| Показатели | Группа животных | |
| Контроль | Опыт | |
| Количество животных, голов | 54 | 57 |
| Выздоровело, голов | 46 | 53 |
| % | 85,2 | 93,0 |
| Пало, голов | 3 | 1 |
| % | 5,6 | 1,7 |
| Остались больными, голов | 5 | 3 |
| % | 9,2 | 5,3 |
| Сроки выздоровления, дней | 4,8±0,2 | 4,3±0,3 |
| Терапевтическая эффективность, % | 85,2 | 93,0 |
| Таблица 10 | ||
| Эффективность лечения сальмонеллеза у поросят в КФХ «Ротарь» Острогожского района Воронежской области | ||
| Показатели | Группа животных | |
| Контроль | Опыт | |
| Количество животных, голов | 120 | 138 |
| Выздоровело, голов | 98 | 132 |
| % | 81,7 | 95,7 |
| Пало, голов | 6 | 0 |
| % | 5,0 | 0 |
| Остались больными, голов | 16 | 6 |
| % | 13,3 | 4,3 |
| Сроки выздоровления, дней | 4,9±0,6 | 4,1±0,4 |
| Терапевтическая эффективность, % | 81,7 | 95,7 |
| Таблица 11 | ||
| Эффективность лечения сальмонеллеза у поросят в ИП «Сорокина О.В.» Таловского района Воронежской области | ||
| Показатели | Группа животных | |
| Контроль | Опыт | |
| Количество животных, голов | 130 | 138 |
| Выздоровело, голов | 113 | 130 |
| % | 86,9 | 94,4 |
| Пало, голов | 5 | 2 |
| % | 3,9 | 1,5 |
| Остались больными, голов | 12 | 6 |
| % | 9,2 | 4,3 |
| Сроки выздоровления, дней | 5,1±0,7 | 4,8±0,6 |
| Терапевтическая эффективность, % | 86,9 | 94,2 |
Как показали проведенные исследования, препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных обладает высокой терапевтической эффективностью при лечении сальмонеллеза у поросят (в среднем 94,4%). Во всех опытах при применении препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных по сравнению с контрольными группами сократились сроки выздоровления на 0,3-0,8 дня, падеж животных уменьшился в 4,4 раза.
Пример 5. Токсикологическая безопасность препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных.
Согласно существующему положению о лекарственных средствах, предназначенных для лечения животных, проведено экспериментальное доклиническое изучение фармакологической активности и токсикологических свойств препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных.
При проведении исследований использовали фармакологические, токсикологические, биохимические, патоморфологические методы исследования, применяемые для изучения лекарственных средств, получившие апробацию в научно-исследовательской практике.
Эксперименты проведены на половозрелых конвенциональных нелинейных разнополых белых мышах с массой тела 20-22 г (191 гол.) и белых крысах с массой тела 200-225 г (132 гол.), разведения вивария Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии. Животные содержались в условиях вивария при 20-22°С и влажности 40-60%. Содержание животных и обеспечение кормами соответствовало нормативным требованиям Международной конвенции.
Определение параметров токсичности препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных в остром опыте проведены при однократном пероральном, внутримышечном и подкожном введении на двух видах лабораторных животных: белых мышах и белых крысах.
Группы животных формировали по принципу парных аналогов, учитывая массу тела, развитие и клиническое состояние. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 12 часов.
Наблюдение за животными проводили непрерывно на протяжении первого дня после введения препарата. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение животных, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, шерстного покрова, поедание корма, потребление воды. Особое внимание уделяли развитию признаков токсикоза, оценивали их тяжесть, продолжительность, время выздоровления или гибели животных.
Препарат вводили однократно внутрь в дозах от 4000,0 до 18000,0 мг/кг массы тела (белые мыши) и от 3500,0 до 17500,0 мг/кг (белые крысы). При однократном внутримышечном введении препарат вводили в дозах от 500,0 до 1700,0 мг/кг (белые мыши) и от 450,0 до 1700,0 мг/кг (белые крысы). При однократном подкожном введении препарат вводили в дозах от 950,0 до 1950,0 мг/кг (белые крысы).
В результате проведенных исследований установлено, что однократное внутрижелудочное введение препарата в дозах 4000,0 и 3500,0 мг/кг массы тела, внутримышечное введение в дозах 500,0 и 450,0 мг/кг и подкожное введение в дозах 950,0 мг/кг не вызывало клинической картины токсикоза у белых мышей и крыс, гибели животных не отмечалось. При дальнейшем повышении вводимой дозы отмечена гибель животных. Латентный период отравления длился 15-90 минут в зависимости от введенной дозы. Смерть наступала обычно в течение первых суток, а при введении высоких доз - через 1,0-1,5 часа.
На основании результатов первичных токсикометрических исследований были получены параметры острой токсичности препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных (таблица 12).
| Таблица 12 | ||||||
| Параметры острой токсичности препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных | ||||||
| Вид живот- ных |
Параметры токсичности (мг/кг) | SLD50 | ||||
| МПД | LD16 | LD50 | LD84 | LD100 | ||
| внутрижелудочное введение | ||||||
| белые мыши | 4000,0 | 6875,1 | 10903,0 (9160-12600) | 14795,7 | 18000,0 | ±863,0 |
| белые крысы | 3500,0 | 6209,2 | 10702,6 (9190-12200) | 15260,8 | 17500,0 | ±754,3 |
| внутримышечное введение | ||||||
| белые мыши | 500,0 | 576,2 | 1038,0 (849-1230) | 1454,4 | 1700,0 | ±92,4 |
| белые крысы | 450,0 | 622,1 | 1033,8 (807-1260) | 1428,3 | 1700,0 | ±109,7 |
| подкожное введение | ||||||
| белые крысы | 950,0 | 1089,1 | 1421,1 (1210-1630) | 1733,7 | 1894,8 | ±99,2 |
Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс сопровождались непродолжительным периодом возбуждения с усилением двигательной активности у большинства особей. У крыс отмечалась агрессивность. За непродолжительным периодом возбуждения развивалось резко выраженное угнетение, состояние глубокого сна, переходящее затем в кому. Животные не реагировали на световой и тактильный раздражители. К моменту гибели животных отмечалось учащенное дыхание и сердцебиение. Дыхание часто становилось поверхностным, прерывистым, развивалась синюшность кожи и слизистых оболочек. Смерть, как правило, наступала в состоянии глубокого угнетения.
Таким образом, на основании полученных результатов в остром опыте можно сказать, что препарат в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76 по степени токсичности относится к IV классу опасности - малоопасные вещества.
В подостром опыте, который проводили на белых крысах-самцах с массой тела 160-180 г при внутримышечном введении препарата в течение 21 дня установлено, что многократное внутримышечное введение препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных в дозах 0,05 мл/кг и 0,20 мл/кг массы тела (1/20 и 1/50 дозы от LD50, установленной в опыте по изучению острой токсичности), не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп, как в период применения препарата, так и в течение одной недели после окончания применения препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных оставались в пределах физиологической нормы. Также не было отмечено случаев гибели животных.
За период наблюдения у животных опытных групп не было отмечено нарушений функций пищеварения и мочеотделения. Крысы опытных групп оставались подвижными, у них не отмечалось нарушение аппетита, были сохранены рефлексы.
Установлено, что препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных оказывает влияние на интенсивность роста животных.
При исследовании крови животных, которым вводили препарат для лечения сальмонеллеза, у молодняка сельскохозяйственных животных в дозах 0,05 мл/кг массы тела, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы (таблицы 13 и 14).
| Таблица 13 | |||
| Морфологические показатели крови белых крыс при многократном внутримышечном применении препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных (через 21 день) | |||
| Показатели | Контроль | Дозы препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных, мл/кг | |
| 0,05 | 0,20 | ||
| Эритроциты, 1012/л | 5,42±0,02 | 5,63±0,09 | 5,37±0,07 |
| Лейкоциты, 109/л | 5,55±0,12 | 6,33±0,71 | 5,47±0,07 |
| Гемоглобин, г/л | 116,8±0,71 | 122,2±2,13 | 118,5±2,97 |
| Гематокрит, г/л | 38,0±0,58 | 41,3±1,20 | 41,0±2,00 |
| Нейтрофилы, % Палочкоядерные | - | - | - |
| Сегментоядерные | 18,0±2,91 | 18,0±3,46 | 24,0±7,00 |
| Эозинофилы, % | 2,75±1,44 | 1,33±0,08 | 1,33±0,33 |
| Базофилы, % | - | - | - |
| Лимфоциты, % | 77,5±2,99 | 76,3±3,71 | 64,7±7,67 |
| Таблица 14 | |||
| Биохимические показатели крови белых крыс при многократном внутримышечном введении препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных (через 21 день) | |||
| Показатели | Контроль | Дозы препарата, мл/кг | |
| 0,05 | 0,20 | ||
| Общий белок, г/л | 66,9±0,91 | 69,5±0,33 | 74,6±1,02 |
| Альбумины, г/л | 33,6±0,16 | 33,8±0,10 | 43,2±0,35* |
| Мочевина, мМ/л | 5,35±0,22 | 5,59±0,06 | 7,51±0,84* |
| Глюкоза, мМ/л | 9,65±0,59 | 9,78±0,07 | 10,13±0,21 |
| Холестерин, мМ/л | 1,28±0,11 | 1,42±0,15 | 1,75±0,04 |
| Общ. липиды, г/л | 2,31±0,12 | 2,24±0,07 | 2,46±0,07 |
| АсАТ, Ед/л | 106,7±4,94 | 119,5±22,5 | 134,2±5,18* |
| АлАТ, Ед/л | 39,25±1,41 | 35,67±1,78 | 52,96±1,97* |
| Креатинин, мкмоль/л | 26,5±0,87 | 21,3±4,66 | 30,0±3,60 |
| ЩФ, ЕД/л | 282,5±12,4 | 372,0±26,3* | 475,3±6,33* |
| Фосфор, мМ/л | 2,33±0,02 | 2,82±0,12 | 2,76±0,16 |
| Кальций, мМ/л | 2,38±0,08 | 2,37±0,02 | 2,48±0,07 |
| *Р<0,05 - 0,001 по сравнению с контролем. | |||
При увеличении дозы препарата для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных (0,20 мл/кг) отмечалась устойчивая тенденция к более напряженному функционированию выделительной системы и печени. При 21-дневном внутримышечном введении препарата в дозе 0,20 мл/кг массы тела у крыс опытной группы достоверно возрастало содержание в сыворотке крови мочевины - на 40,4%, альбуминов - на 28,6%, активность АлАТ, АсАТ - на 34,9 и 25,8% соответственно, щелочной фосфатазы - в 1,7 раза. Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида животных. Через 10 дней после последнего введения препарата данные показатели у опытных животных восстанавливались до физиологических значений.
При изучении кумулятивной способности препарата по методу Лима дробное введение препарата белым крысам в возрастающих дозах не вызвало гибели животных. В связи с отсутствием гибели 50% подопытных крыс коэффициент кумуляции рассчитать было невозможно. Но, учитывая, что введенные дозы составляют 12,7 LD50, то возможный коэффициент кумуляции превышает 12. Это свидетельствует об отсутствии кумулятивного эффекта у препарата.
При изучении субхронической токсичности препарата в дозах 0,05 и 0,15 мл/кг массы тела в течение 14 дней с интервалом между введениями 24 часа, проведенного на поросятах и телятах, установлено, что его внутримышечное введение в изученных дозах не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В период всего опыта как поросята, так и телята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Препарат в различных дозах не снижал скорости роста животных.
При многократном применении препарата морфологические и биохимические показатели крови существенно не отличались от показателей у животных контрольной группы.
Таким образом, проведенные испытания препарата для лечения сальмонеллеза у поросят и телят показали, что он обладает широким спектром антимикробного действия, выраженным лечебным действием при сальмонеллезе у поросят и телят, является малотоксичным. Применение препарата технологично и экономически выгодно.
Формула изобретения
Препарат для лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных, содержащий колистина сульфат и антибиотик из группы макролидов, отличающийся тем, что он дополнительно содержит пиросульфит натрия, спирт бензиловый, воду для инъекций и 1,2-пропиленгликоль, а в качестве антибиотика группы макролидов используется тилозин основание при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Колистина сульфат | 4,0-6,0 |
| Тилозин основание | 4,0-6,0 |
| Пиросульфит натрия | 0,32 |
| Спирт бензиловый | 4,0 |
| Вода для инъекций | 15,0 |
| 1,2-Пропиленгликоль | До 100,0 |
ИЗВЕЩЕНИЯ
MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 26.02.2011
Дата публикации: 10.01.2012
NF4A Восстановление действия патента
Дата, с которой действие патента восстановлено: 27.07.2013
Дата внесения записи в Государственный реестр: 26.07.2013
Дата публикации: 27.07.2013
MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 26.02.2015
Дата публикации: 27.10.2015
NF4A Восстановление действия патента
Дата, с которой действие патента восстановлено: 10.02.2016
Дата внесения записи в Государственный реестр: 25.01.2016
Дата публикации: 10.02.2016
MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 26.02.2017
Дата внесения записи в Государственный реестр: 07.11.2017
Дата публикации и номер бюллетеня: 07.11.2017 Бюл. №31