РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ |
(19)
RU
(11)
(13)
C1
|
|||||
|
||||||
| Статус: | не действует (последнее изменение статуса: 02.07.2021) |
| Пошлина: | учтена за 4 год с 01.11.2011 по 31.10.2012. Возможность восстановления: нет. |
|
(21)(22) Заявка: 2008143376/28, 31.10.2008 (24) Дата начала отсчета срока действия патента: (45) Опубликовано: 27.03.2010 Бюл. № 9 (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: RU 2294919 C1, 10.03.2007. RU 2326165 C1, 10.06.2008. CN 1760166 A, 19.04.2006. CN 1384088 A, 11.12.2002. Адрес для переписки: |
(72) Автор(ы):
(73) Патентообладатель(и):
|
(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ РЕЗВЕРАТРОЛА
(57) Реферат:
Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к способам идентификации резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) с применением хроматографических методов разделения, в частности, тонкослойной хроматографией, и может быть использовано при определении содержания резвератрола в чистом виде, а также в объектах различного происхождения. Способ идентификации изомеров резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) методом тонкослойной хроматографии включает подготовку образцов путем растворения исследуемого вещества в спирте. Затем наносят образцы на хромотографические пластинки и хромотографирование проводят восходящим способом с последующим высушиванием пластин на воздухе. При этом в качестве подвижной фазы используют систему растворителей «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1, причем выявление транс-резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) проводят диазотированной сульфаниловой кислотой после предварительного опрыскивания пластин 1%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида. Техническим результатом изобретения является разработка простого в исполнении способа идентификации транс- и цис-изомеров резвератрола методом тонкослойной хромотографии с учетом его полярности, пригодного для анализа резвератрола в объектах различного происхождения. 3 н.п. ф-лы.
Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к способам идентификации резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) с применением хроматографических методов разделения, в частности, тонкослойной хроматографией, и может быть использовано при определении содержания резвератрола в чистом виде, а также в объектах различного происхождения.
Наиболее близким решением является способ идентификации транс-резвератрола производных в растительных экстрактах и лекарственных формах методом хроматографии в тонком слое сорбента [1]. В данном способе при анализе транс-резвератрола в экстрактах из корней Polygonum cuspidatum и в лекарственных формах используют хроматографические пластинки на основе алюминиевой фольги с силикагелем 60F-254. Перед использованием хроматографические пластинки предварительно промывают метанолом и выдерживают в течение 5 минут при температуре 60°С. Исследуемые образцы наносят в виде полос на хроматографические пластинки микрошприцем с помощью автоматического аппликатора.
Для определения содержания транс-резвератрола в экстракте корней Polygonum cuspidatum 50 мг растительного сырья количественно переносят в мерную колбу на 100 мл, содержащую 50 мл метанола, перемешивают в течение 10 минут, после чего объем в колбе доводят до 100 мл метанолом. Полученный экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр, полученные образцы наносят на хроматографическую пластинку. Для определения содержания транс-резвератрола в капсулах и таблетках определяют среднюю массу одной капсулы/таблетки. Затем берут навеску предварительно измельченного содержимого капсулы/таблетки в количестве, равном средней массе, переносят в мерную колбу на 100 мл, содержащую 50 мл метанола, перемешивают в течение 10 минут, после чего объем в колбе доводят до 100 мл метанолом. Содержимое колбы отфильтровывают через бумажный фильтр, полученные образцы наносят на хроматографическую пластинку.
Хроматографирование проводят восходящим способом с использованием подвижной фазы «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении
2,5:1:0,1. После хроматографирования пластинки высушивают на воздухе. Регистрацию проводят с помощью автоматического сканера при длине волны λ=313 нм с последующей компьютерной обработкой. Величина Rf резвератрола составляет 0,4±0,03. Предел обнаружения транс-резвератрола в пятне - 9 мг.
Недостатками данного способа являются: его непригодность для анализа смеси изомеров резвератрола, эмпирический выбор подвижной фазы, длительная пробоподготовка, сложное аппаратурное оформление.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка простого в исполнении способа идентификации транс- и цис-изомеров резвератрола методом тонкослойной хромотографии с учетом его полярности, пригодного для анализа резвератрола в объектах различного происхождения.
Поставленная задача решается тем, что использован вариант двумерной высокоэффективной тонкослойной хроматографии с применением в качестве подвижных фаз систем растворителей «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении компонентов 12,5:5:0,5 (система 1) и «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1 (система 2). Выявление транс-резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) проводят диазотированной сульфаниловой кислотой после предварительного опрыскивания пластин 1%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида, а идентичность цис-резвератрола подтверждают спектрофотометрически. Для идентификации только транс-резвератрола в качестве подвижной фазы использована система растворителей «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1.
Предлагаемый способ позволяет наглядно идентифицировать изомеры резвератрола в объектах различного происхождения без длительной пробоподготовки, характеризуется высокой чувствительностью определения и легкостью реализации, что дает возможность использовать его в анализе для подтверждения подлинности и чистоты данного вещества, как в нативном виде, так и в многокомпонентных смесях. Оптимален выбор растворителя и подвижной фазы, так как исследуемый препарат в силу своих физико-химических свойств практически не растворим не только в воде, но и в большинстве органических растворителей, за исключением спирта этилового.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Способ идентификации транс-резвератрола в жидкой лекарственной форме
Процесс хроматографирования осуществляют в тонком слое силикагеля на пластинках марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А-УФ размером 15×10 см. Для приготовления образца 1 мл жидкой лекарственной формы на основе резвератрола переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки спиртом этиловым 96%-ным. На линию старта микрошприцем наносят 20 мкл полученного раствора, рядом - эквивалентное количество свидетеля - 0,0002%-ного раствора стандарта транс-резвератрола в спирте этиловом 96%-ном. Хроматографируют восходящим способом с использованием подвижной фазы «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1. По окончании процесса хроматографирования пластинку вынимают из хроматографической камеры и высушивают на воздухе в течение 15 минут. Выявление проводят с помощью реакции азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой. Для этого пластинку предварительно опрыскивают 1%-ным спиртовым раствором гидроксида натрия, высушивают и обрабатывают свежеприготовленным раствором диазотированной сульфаниловой кислоты.
После проявления на хроматографической пластинке обнаруживают пятно желто-коричневого цвета со значением Rf=0,5, совпадающее с пятном свидетеля транс-резвератрола.
Пример 2. Способ идентификации изомеров резвератрола в модельной смеси
Процесс хроматографирования проводят на стеклянной пластинке с закрепленным слоем силикагеля марки КСКГ для высокоэффективной хроматографии в тонком слое сорбента. Для приготовления образца аналитическую навеску резвератрола массой 0,01 г переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки спиртом этиловым 96%-ным. Отбирают аликвоту в объеме 1 мл и доводят в мерной колбе вместимостью 50 мл спиртом этиловым 96%-ным. На линию старта микрошприцем наносят 20 мкл полученного раствора, рядом - эквивалентное количество свидетеля - 0,0002%-ного раствора стандарта транс-резвератрола в спирте этиловом 96%-ном. Хроматографируют с использованием подвижной фазы «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1. По окончании процесса хроматографирования пластинку вынимают, высушивают на воздухе. Выявление пятен осуществляют аналогично примеру 1. После проявления на пластине наблюдают два пятна со значением Rf=0,38 (цис-резвератрол) и Rf=0,42 (транс-резвератрол).
Идентичность цис-резвератрола подтверждают спектрофотометрически, счищая сорбент с соответствующих участков хроматографических пластин в параллельном опыте без проявления, растворяют его в спирте этиловом 96%-ном, фильтруя через складчатый фильтр и измеряют спектр полученного раствора в УФ-области. Регистрируют максимум светопоглощения при 288 нм.
Пример 3. Способ идентификации изомеров резвератрола в жидкой лекарственной форме
Процесс хроматографирования проводят на стеклянной пластинке с закрепленным слоем силикагеля марки КСКГ для высокоэффективной тонкослойной хромотографии в двухмерном варианте. Для приготовления образца 1 мл жидкой лекарственной формы на основе резвератрола переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки спиртом этиловым 96%-ным. На линию старта микрошприцем наносят 20 мкл полученного раствора. Хроматографируют восходящим способом с использованием подвижной фазы «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении компонентов 12,5:5:0,5 (система 1). После высушивания пластину поворачивают на 90° и хроматографируют с использованием подвижной фазы «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1 (система 2). По окончании процесса хроматографирования пластинку вынимают, высушивают на воздухе. Выявление изомеров резвератрола осуществляют аналогично примеру 1. После проявления на пластине наблюдают два пятна со значением Rf=0,38 (цис-резвератрол), Rf=0,42 (транс-резвератрол).
Параллельно в тех же условиях на отдельной пластине хроматографируют эквивалентное количество свидетеля - 0,0002%-ного раствора стандарта транс-резвератрола в спирте этиловом 96%-ном. Идентичность цис-резвератрола в основном опыте подтверждают спектрофотометрически, счищая сорбент с соответствующих участков хроматографических пластин в параллельном опыте без проявления, растворяя его в спирте этиловом 96%-ном, фильтруя через складчатый фильтр и измеряя спектр полученного растворы в УФ-области. Регистрируют максимум светопоглощения при 298 нм.
Источники информации.
1. S.К.BABU, К.V.KUMAR, G.V.SUBBARAJU. Estimation of trans-Resveratrol in Herbal Extracts and Dosage Forms by High-Performance Thin-Layer Chromatography. Chem. Pharm. Bull. 53(6) 691-693 (2005).
Формула изобретения
1. Способ идентификации изомеров резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) методом тонкослойной хроматографии, включающий подготовку образцов путем растворения исследуемого вещества в спирте, нанесение образцов на хроматографические пластинки и хроматографирование проводят восходящим способом с последующим высушиванием пластин на воздухе, отличающийся тем, что в качестве подвижной фазы использована система растворителей «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1, причем выявление транс-резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) проводят диазотированной сульфаниловой кислотой после предварительного опрыскивания пластин 1%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида.
2. Способ идентификации изомеров резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) методом тонкослойной хроматографии, включающий подготовку образцов путем растворения исследуемого вещества в спирте, нанесение образцов на хроматографические пластинки и хроматографирование проводят восходящим способом с последующим высушивание пластин на воздухе, отличающийся тем, что использован вариант двумерной высокоэффективной тонкослойной хроматографии с применением в качестве подвижных фаз систем растворителей «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении компонентов 12,5:5:0,5 (система 1) и «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1 (система 2), причем выявление транс-резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) проводят диазотированной сульфаниловой кислотой после предварительного опрыскивания пластин 1%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида.
3. Способ идентификации изомеров резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) методом тонкослойной хроматографии, включающий подготовку образцов путем растворения исследуемого вещества в спирте, нанесение образцов на хроматографические пластинки и хроматографирование проводят восходящим способом с последующим высушивание пластин на воздухе, отличающийся тем, что использован вариант двумерной высокоэффективной тонкослойной хроматографии с применением в качестве подвижных фаз систем растворителей «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении компонентов 12,5:5:0,5 (система 1) и «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1 (система 2), причем выявление цис-резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) проводят диазотированной сульфаниловой кислотой после предварительного опрыскивания пластин 1%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида.
ИЗВЕЩЕНИЯ
PD4A Изменение наименования, фамилии, имени, отчества патентообладателя
(73) Патентообладатель(и):
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (RU)
Дата публикации: 10.04.2012
MM4A Досрочное прекращение действия патента из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 01.11.2012
Дата публикации: 27.08.2013