РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(19) RU (11) 2 800 287 (13) C1 (51) МПК A61K 9/20 (2006.01) A61K 31/44 (2006.01) A61K 31/724 (2006.01) A61K 38/12 (2006.01) A61K 47/10 (2006.01) A61K 47/26 (2006.01) A61P 31/04 (2006.01)

Статус:	действует (последнее изменение статуса: 24.06.2025)	Начисление для уплаты пошлины за поддержание патента в силе
Пошлина:	учтена за 5 год с 16.09.2026 по 15.09.2027. Установленный срок для уплаты пошлины за 6 год: с 16.09.2026 по 15.09.2027. При уплате пошлины за 6 год в дополнительный 6-месячный срок с 16.09.2027 по 15.03.2028 размер пошлины увеличивается на 50%.

(52) СПК A61K 9/20 (2023.05); A61K 31/44 (2023.05); A61K 31/724 (2023.05); A61K 38/12 (2023.05); A61K 47/10 (2023.05); A61K 47/26 (2023.05); A61P 31/04 (2023.05)

(21)(22) Заявка: 2022124429, 15.09.2022 (24) Дата начала отсчета срока действия патента: 15.09.2022 Дата регистрации: 19.07.2023 Приоритет(ы): (22) Дата подачи заявки: 15.09.2022 (45) Опубликовано: 19.07.2023 Бюл. № 20 (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: Граммидин нео (Grammidin neo), [найдено 21.03.2023], [найдено в Интернет]: https://www.vidal.ru/drugs/grammidin_neo__20563, дата обновления: 14.05.2018. US 5120720 A, 09.06.1992. RU 2733715 C2, 06.10.2020. CN 108990979 A, 14.12.2018. US 2004019012 A1, 29.01.2004. DRANNIKOV A.A. et al. Investigation of the Influence of Formulation Method on Technological Parameters of Gramicidin S and β-cyclodextrin Inclusion Complexes. Drug development & registration, 2022, 11(2):102-108, https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-2-102-108. THIAGO M.MIRANDA et al. Mechanisms of interaction of Cetylpyridinium chloride with Staphylococcus aureus in the presence of β-cyclodextrin. Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 2020, 97:205-215, https://doi.org/10.1007/s10847-020-00996-x. Адрес для переписки: 105064, г. Москва, а/я 88, ООО "Патентные поверенные Квашнин, Сапельников и партнеры", Квашнин Валерий Павлович

(72) Автор(ы): Балабаньян Вадим Юрьевич (RU), Фазылов Марат Феликсович (RU) (73) Патентообладатель(и): ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "ВАЛЕНТА-ИНТЕЛЛЕКТ" (RU)

(54) АНТИБАКТЕРИАЛЬНАЯ КОМПОЗИЦИЯ ГРАМИЦИДИНА С, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности и касается новых лекарственных средств на основе грамицидина C.

Предшествующий уровень техники

Одной из востребованной и эффективной терапии больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями полости рта является использование топических лекарственных средств, при котором сводится к минимуму токсическое действие на организм и микробиоту человека (Карнеева О.В., Дайхес Н.А., Поляков Д.П. Протоколы диагностики и лечения острых тонзиллофарингитов // Русский медицинский журнал. 2015. № 6. С. 307-311).

Пациентам с инфекционно-воспалительными заболеваниями глотки рекомендуют назначение препаратов Граммидин^® нео или Граммидин® с анестетиком нео (Свистушкин В.М., Никифорова Г.Н., Мокоян Ж.Т. Место топических антимикробных лекарственных средств в фармакотерапии инфекционно-воспалительных заболеваний глотки. РМЖ. 2017; 23:1739-1743). Активными веществами препарата Граммидин^® нео являются грамицидин С и цетилпиридиния хлорид.

Грамицидин С был впервые получен в СССР в 1942 г. Он представляет собой циклический декапептид, включающий по два остатка аминокислот: L-валина, L-орнитина, L-лейцина, D-фенилаланина и L-пролина. Грамицидин С оказывает антибактериальное действие в отношении широкого спектра грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Известны технические решения, в которых грамицидин С находится в твердой форме, лекарственные препараты с ним выпускаются в виде таблеток для рассасывания. (Патенты РФ №№ 2213558, 2160088, 2590980). Однако грамицидин С практически не растворяется в воде, что снижает его биодоступность, поэтому предложены различные способы повышения его растворимости.

Известна фармацевтическая субстанция на основе грамицидина С, циклодекстрина и хитозана, в которой грамицидин С инкапсулирован в циклодекстрин с последующим образованием полиэлектролитного комплекса с хитозаном (Патент РФ № 2733715). Компоненты находятся в следующих соотношениях в % масс.: грамицидин С (1-31,25), циклодекстрина (2-62,5) и хитозана (6,25-97). Фармацевтическая субстанция имеет пролонгированное действие и повышенную растворимость за счет возможной инкапсуляции наиболее гидрофобной части D-фенилаланина в молекуле грамицидина С. При этом технический эффект, на который направлено данное техническое решение, заключается в расширении средств данного назначения, а точные данные о повышении растворимости не приводятся.

В другой работе показано, что при сравнении химических сдвигов грамицидина С, циклодекстрина и их совместного комплекса, было обнаружено значительное изменение химического значения с 7,91 до 7,69 для протонов аминогруппы L-орнитина в молекуле грамицидина С в комплексе с циклодекстрином (Дранников А. А., Ватлин И. С., Трусова М. Е., Ди Мартино А., Кривощеков С. В., Гурьев А. М., Белоусов М. В. Исследование влияния способа получения комплексов включения грамицидина С и β-циклодекстрина на их технологические показатели. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022; 11(2) С. 102-108. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2022-11-2-102-108).

Циклодекстрины являются производными крахмала и широко используются в фармацевтической промышленности благодаря своей специфической структуре с полостью, подходящей для включения других молекул. Это специфическое свойство циклодекстринов широко применяется в фармации для изменения высвобождения лекарственного вещества, маскировки негативных органолептических свойств, а также β для улучшения его растворимости в воде (Патент РФ №2099354). Однако циклодекстрины, как природные, такие как α, β, γ, так и различные синтетические производные, такие как гидроксипропилпроизводные β, γ и метилированные β-циклодекстрины, сульфобутиловые эфиры β-циклодекстрина и т.д., отличающиеся по структуре, соответственно, по свойствам и применению, не обеспечивают равнозначное улучшение необходимых свойств для разных фармацевтически активных субстанций.

В частности, было обнаружено, что комплексообразование грамицидина C с β-циклодекстрином увеличивает растворимость лекарственного средства в воде и обеспечивает длительное высвобождение грамицидина C при рН = 4,3 в течение по меньшей мере 48 ч. Однако при более высоком уровне рН высвобождение практически отсутствовало (Drannikov, А. А. (2020). Influence of gramicidin S and [beta]-cyclodextrin complexation techniques on the drug release. Химия и химическая технология в XXI веке: материалы XXI Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых имени выдающихся химиков Л. П. Кулёва и Н. М. Кижнера, посвященной 110-летию со дня рождения профессора А. Г. Стромберга, 21-24 сентября 2020 г., Томский политехнический университет, С. 525-526.).

Недостатком комплекса грамицидина C с β-циклодекстрином является отсутствие высвобождения грамицидина С при pH выше 4,3, что делает его неприменимым практически для всех физиологических сред, в том числе при его растворении в обычной воде с нейтральным pH для полоскания горла.

Известны жидкие лекарственные формы на основе грамицидина С и цетилпиридиния хлорида (патенты РФ №№ 2627423, 2749902). Данные композиции включают в своем составе этанол, что существенно ограничивает их использование водителям автотранспорта, беременным и другим категориям граждан.

Наиболее близким по составу к заявляемой антибактериальной композиции является лекарственный препарат Граммидин^® нео в виде таблеток для рассасывания, обладающий антибактериальным действием, состав которого принят в качестве прототипа (https://www.vidal.ru/drugs/grammidin_neo_20563).

Граммидин^® нео имеет следующий состав веществ в композиции:

грамицидин С дигидрохлорид - 3,20 мг (в пересчете на грамицидин С - 3 мг);

цетилпиридиния хлорида моногидрат - 1,05 мг (в пересчете на цетилпиридиния хлорид - 1 мг);

кремния диоксид коллоидный - 5 мг;

тальк - 60 мг;

ацесульфам калия - 15 мг;

ароматизатор мятный - 25 мг;

сорбитол - 1065,75 мг;

магния стеарат - 25 мг.

Общая масса таблетки составляет 1200 мг.

Данный препарат нашел широкое применение в медицинской практике для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний полости рта и глотки, ангины, фарингита, тонзиллита, пародонтоза, гингивита и стоматита. Граммидин^® нео является комбинированным лекарственным средством, уменьшающим воспаление, оказывающим противомикробное действие, смягчающим неприятные ощущения в горле, облегчающим глотание, при рассасывании вызывает гиперсаливацию, что способствует механическому очищению полости рта и глотки от микроорганизмов.

Настоящее изобретение в отличие от прототипа представляет собой таблетки для приготовления раствора для местного и наружного применения. Замена таблеток для рассасывания на раствор для полоскания рассматривается в качестве эффективной с медицинской и экономической точек зрения превентивной меры при инфекциях верхних дыхательных путей (Sakai M., Shimbo T., Omata K. et al.; Great Cold Investigators-I. Cost-effectiveness of gargling for the prevention of upper respiratory tract infections. BMC Health Serv. Res. 2008; 8: P. 258). При ирригационных процедурах возникает значительная площадь контакта раствора со слизистой оболочкой, создаются благоприятные условия для лучшего местного воздействия (Е.В. Носуля. Полоскание в комплексном лечении тонзиллофарингитов. Терапевтический архив 10, 2014, с. 128-131). При полоскании более эффективно происходит очищение за счет дыхательных движений жидкостью в полости рта, интенсивность которых регулируются самим больным. Также расширяется диапазон применения раствора, который можно применять не только для полоскания горла, но у целей наружного применения в качестве местного антибактериального средства.

Сложностью получения такого раствора является практически отсутствие растворимости грамицидина С в воде. Решением данной проблемы могло бы стать повышение растворимости грамицидина С в воде c pH 5,5 и более.

Задачей заявляемого технического решения является разработка антибактериального комплекса грамицидина С с улучшенной растворимостью и новой стабильной антибактериальной композиции в виде таблеток для приготовления раствора для местного или наружного применения на его основе.

Задача решается тем, что добиться повышенной растворимости грамицидина С в воде удалось включением в матрицу 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли и цетилпиридиния хлорида или его моногидрата, который является поверхностно-активным веществом. Такое сочетание трех компонентов в виде заявленного комплекса грамицидина С позволило повысить его растворимость до степени, достаточной для приготовления эффективного антибактериального раствора для местного или наружного применения.

Грамицидин С и его фармацевтически приемлемые соли оказывают выраженное противомикробное действие в отношении возбудителей инфекционных заболеваний полости рта и глотки. Грамицидин С может использоваться в виде фармацевтически приемлемых солей, например, таких как гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, фосфаты, бензоаты, лактаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, малонаты, салицилаты и др. (RU 2749902 C2). В качестве предпочтительной соли может быть указана соль, представляющая собой дигидрохлорид.

Цетилпиридиния хлорид (цетилпиридиния хлорид моногидрат) - антисептик из группы четвертичных аммониевых оснований, обладает вариабельной противогрибковой активностью, бактерицидным действием в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, эффективен в отношении некоторых вирусов. Цетилпиридиния хлорид оказывает дезинфицирующее действие на слизистую оболочку.

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин представляет собой циклический олигосахарид, молекулы которого по своей форме напоминают тор или полый внутри усеченный конус. Внутри тора гидроксильных групп нет, поэтому внутренняя полость является гидрофобной, а внешняя оболочка - гидрофильной. Неожиданно выбор данного циклодекстрина в сочетании с цетилпиридиния хлоридом позволил преодолеть проблемы связанные с зависимостью растворимости грамицидина С от рН.

Антибактериальный комплекс согласно настоящему изобретению включает 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль (в пересчете на грамицидин С), цетилпиридиния хлорид или его моногидрат (в пересчете на цетилпиридиния хлорид) в массовых соотношениях 6-100:3:1. Предпочтительное соотношение составляет 25:3:1.

Антибактериальная фармацевтическая композиция, выполненная в виде таблетки для приготовления раствора для местного или наружного применения, включает указанный комплекс и набор фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.

Более подробно, антибактериальная фармацевтическая композиция, выполненная в виде таблетки для приготовления раствора для местного или наружного применения, имеет следующий состав:

антибактериальный комплекс 10,00-104,00 мг

маннитол - 230,0-270,0 мг

кросповидон - 30,0-36,0 мг

сорбитол - 29,0-35,0 мг

аспартам - 6,0-10,0 мг;

полиэтиленгликоль 4000 -3,0-5,0 мг.

Таблетки могут дополнительно включать, по крайней мере, один ароматизатор, предпочтительно в количестве - 6-13 мг. Например, по крайней мере, один ароматизатор может быть выбран из группы: малиновый, клубничный, абрикосовый, мятный, грушевый, яблочный, лимонный, коричный и т.п.

Еще одним объектом изобретения является способ получения заявляемой антибактериальной композиции, который проводится в несколько стадий.

На первой стадии берут необходимые навески цетилпиридиния хлорида (или его моногидрата) и 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, добавляют воду, перемешивают до образования прозрачного раствора, добавляют к нему грамицидин С или его фармацевтически приемлемую соль, перемешивают в течение 40-50 минут до получения прозрачного или слабо опалесцирующего раствора, замораживают полученный раствор и проводят лиофильное высушивание. Образуется комплекс из грамицидина С, цетилпиридиния хлорида и 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина. На данной стадии важен порядок добавления реагентов.

На второй стадии смешивают полученный комплекс с указанными в составе вспомогательными веществами, перемешивают путем встряхивания и далее прессуют в таблетки, предназначенные для получения раствора для местного или наружного применения.

Еще одним объектом изобретения является применение заявляемой антибактериальной композиции как местного или наружного антибактериального средства, заключающееся в растворении антибактериальной композиции в воде и применении раствора по необходимому назначению: ополаскивании горла, протирании мест, требующих дезинфекции и т.п. Полученный раствор может быть использован, например, при ангинах, фарингите, тонзиллите, пародонтозе, гингивите, стоматите и т.п.

Технический результат изобретения заключается в создании новой стабильной антибактериальной композиции для приготовления раствора для местного и наружного применения на основе комплекса грамицидина С, имеющего улучшенную растворимость, что расширяет арсенал доступных антибактериальных лекарственных средств для наружного применения, в уменьшении количества необходимых вспомогательных веществ более чем в 3 раза, в новом способе получения антибактериальной композиции, в применении антибактериальной композиции в виде раствора, которой позволяет обработать значительную площадь слизистой оболочки и наружных поверхностей, без излишнего эффекта саливации, более эффективно очищать полость рта за счет дыхательных движений, интенсивность которых регулируются самим больным, свести к минимуму токсическое действие на организм и микробиоту человека за счет отсутствия приема раствора внутрь организма.

Была изучена стабильность заявляемой антибактериальной композиции в тесте ускоренного хранения, при температуре 40±2°С и относительной влажности воздуха 75±5% в трех видах упаковки: стрип из пленки буфлен (PAP/PE/ALU/PE), стрип из пленки ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ, блистеры белые (PVC/ALU). Показано, что в пленке буфлен (PAP/PE/ALU/PE) и пленке ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ заявляемая фармацевтическая композиция выдерживает данный тест в течение 6 мес. без потери активных компонентов, что соответствует двум годам хранения в обычных условиях (Таблица 2).

Была изучена антибактериальная активность заявляемой антибактериальной композиции in vitro. Было установлено, что заявляемая фармацевтическая обладает антимикробной активностью в отношении всех исследованных штаммов Streptococcus pneumoniaе и Staphylococcus aureus. Вспомогательные вещества в составе композиции не препятствовали высвобождению действующих веществ грамицидина С и цетилпиридиния хлорида и не влияли на их бактерицидное действие. Полученные значения МПК и МБК, в подавляющем большинстве случаев различающиеся не более, чем в 4 раза для разных штаммов (Таблица 3), демонстрируют наличие у антибактериальной композиции высокой бактерицидной активности в отношении типичных возбудителей инфекционно-воспалительной патологии ЛОР-органов и, в частности, патологии ротоглотки, что позволяет эффективно ее применять в клинической практике для местного и наружного применения.

Использованные приборы:

- весы лабораторные электронные AR 2140, AdventurerTM (Швейцария) и AUW-220D (Shimadzu, Япония);

- установка для получения воды очищенной УВО-0,2 (Россия);

- система получения воды Simplicity Water Purification System (Millipore, США);

- климатическая камера СМ 5/100-80 ТВО (ООО «СМ Климат», Россия);

- лабораторный идентификатор процесса распадаемости (ЗАО «Фармаген», Россия);

- настольный лабораторный пресс Korsch тип eko (Erweka, Германия);

- блистерная машина TOP BLISTER (Farmalabor Srl, Италия);

- автоматическая блистерная машина DPP-150 Al-plastic automatic blister packing machine, Zhejiang Jiangnan Pharmaceutical Machinery Co. (Китай).

- ручной импульсный аппарат CNT-200 (запайщик пакетов) (CAS Corporation, Корея);

- хроматограф высокого давления LC-20 Prominence (Shimadzu, Япония) с диодно-матричным детектором и колонкой Gemini C6-Phenyl 4,6х250 мм (размер частиц сорбента 5 мкм) (Phenomenex, США) с предколонкой размером 3,0 мм, заполненной тем же сорбентом;

- лиофильная сушилка ЛС-1000; ООО «Проинтех», Россия. Скорость сушки не менее 100 г/ч. Температура конденсатора -50°С, мощность 6 кг льда. Рабочее давление в вакуумной камере сушилки 6,67 Па (5·10-2 мм рт. ст.);

- холодильник Electrolux ENA38933W, температура морозильного отделения -22°С.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, но не ограничивается ими.

Пример 1. Составы антибактериальной композиции.

Состав 1.

грамицидин С- 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

Состав 2.

грамицидина С дигидрохлорид- 3,2 мг (в пересчете на грамицидин 3,0 мг);

цетилпиридиния хлорида моногидрат - 1,05 мг (в пересчете на цетилпиридиния хлорид 1,0 мг);

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг

Состав 3.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

маннитол - 256,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 4.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 6 мг.

маннитол - 256,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «груша» - 6 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 5.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 100 мг.

маннитол - 256,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 6.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

маннитол - 256,75 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг.

Состав 7.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 25 мг.

маннитол - 260,0 мг;

кросповидон -35,0 мг;

аспартам - 10 мг

полиэтиленгликоль 4000 - 5,0 мг.

Состав 8.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 15 мг.

маннитол - 252 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 30 мг;

аспартам (Е951) - 6 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Состав 9.

грамицидин С - 3 мг;

цетилпиридиния хлорид - 1 мг;

2-гидроксипропил-β-циклодекстрин - 10 мг.

маннитол - 241,75 мг;

кросповидон - 33 мг;

сорбитол - 32 мг;

аспартам (Е951) - 8 мг;

ароматизатор «зеленое яблоко» - 8 мг;

ароматизатор «корица» - 5 мг;

полиэтиленгликоль 4000 - 4 мг.

Пример 2. Получение заявляемой антибактериальной композиции.

На весах отвешивают 0,213 г цетилпиридиния хлорида и 5,088 г 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина помещают в стакан вместимостью 50 мл, добавляют 7,3 мл воды. Стакан ставят на магнитную мешалку и перемешивают до получения прозрачного раствора. Затем в полученный раствор добавляют 0,639 г грамицидина С и перемешивают до получения прозрачного или слабо опалесцирующего раствора в течение 40-50 мин. Полученный раствор переносят в морозильную камеру и замораживают при -22°С. Замороженный раствор затем лиофильно высушивают. Полученный комплекс измельчают в фарфоровой ступке и просеивают через сито (0,5 мм). К полученному комплексу последовательно добавляют 53,71 г брикетированного маннитола; 0,8356 г измельченного и просеянного ПЭГ 4000; 6,897 г кросповидона; 6,688 г сорбитола; по 1,6772 г аспартама и ароматизатора «зеленое яблоко» и 1,045 г ароматизатора «корица», перемешивают путем встряхивания 5-20 мин. Порядок действий будет аналогичным для других соотношений компонентов. Потеря массы при просеивании порядка 1%. Полученную композицию прессуют в таблетки для приготовления раствора для местного и наружного применения. Получают фармацевтическую композицию, соответствующую Составу 3 Примера 1. Сравнение с прототипом показано в таблице 1.

Составы 1,2,4-9 готовили аналогичным образом, добавляя компоненты фармацевтической композиции в указанных в Примере 1 пропорциях не изменяя порядок их смешивания. Для приготовления каждой композиции цетилпиридиния хлорид брался в количестве 0,2-0,3 г, грамицидина С - в 3 раза больше по массе. Остальные компоненты после приготовления антибактериального комплекса добавлялись в соответствии с указанными составами в Примере 1.

Растворимость грамицидина С определяли следующим образом. Готовили насыщенный раствор из антибактериальной композиции (Составы 1-9 Примера 1) добавляя избыток грамицидина С и заявляемой композиции, чтобы через 30 мин после перемешивания на магнитной мешалке оставался видимый осадок, фильтровали от осадка через фильтр с размерами пор 0,22 мкм и в полученном растворе количественно методом ВЭЖХ определяли содержание грамицидина С по методике в соответствии с описанием примера 3. Было обнаружено, что для разных составов композиций после их растворения в воде содержание в ней грамицидина С в 8 и более раз выше в сравнении с раствором грамицидина С.

Были получены варианты таблеток с массой 370 мг или другой массой, которые могут ограничиться лишь доступным набором форм для таблеточного пресса. Таблетки распадались менее чем за 3 мин в тесте распадаемости в соответствии с ГФ ХIV ОФС.1.4.2.00013.15.

Пример 3. Определение стабильности антибактериальной композиции.

С целью оценки более отдаленных химических эффектов и оценки влияния на стабильность ГЛФ кратковременных отклонений от условий естественного хранения («ускоренное старение») произведена закладка опытных образцов таблеток заявляемой антибактериальной композиции (по 20 таблеток на точку) в трех видах первичной упаковки для хранения при температуре 40±2°С и относительной влажности 75±5%. Образцы анализировали через 22 дня, 45 суток, 3 и 6 месяцев.

Испытание проводили в соответствии со стандартной методикой «Стабильность и сроки годности лекарственных средств в соответствии с ГФ ХIV ОФС.1.1.0009.18.

Количественный анализ содержания компонентов выполнен на хроматографе высокого давления фирмы Shimadzu с диодно-матричным детектором и колонкой Gemini C6-Phenyl 4,6×250 мм (размер частиц сорбента 5 мкм) и предколонкой (3 мм) заполненной тем же сорбентом (Phenomenex, США) в градиентном режиме элюирования смесью 0,1 М раствора однозамещенного фосфата натрия с рН3,0 (подвижная фаза А) и метанола (подвижная фаза Б), скорость подачи элюента 1 мл/мин, дозируемый объем проб 20 мкл, длина волны детектирования 220 нм; температура термостата колонок комнатная.

Таблетки антибактериальной композиции составов 1-9 Примера 1 были упакованы в два вида упаковки: материал комбинированный Буфлен (состав материала: PAP/PE/ALU/PE); материал комбинированный ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ.

Результаты изучения стабильности антибактериальной композиции в условиях «ускоренного старения» в трех видах упаковки при температуре 40±2°С и относительной влажности 75±5% представлены в Таблице 2 (Состав 3). Полученные результаты свидетельствуют о стабильности ГЛФ в каждой из упаковок. Содержания действующих веществ при ускоренном хранении антибактериальной композиции Составов 1, 2, 4-9 Примера 1 отличались не более чем на 10% от Состава 3.

Пример 4. Определение антибактериальной активности заявляемой антибактериальной композиции.

Для подтверждения антибактериальных свойств заявляемой антибактериальной композиции (Состав 3, Пример 1) в сравнении с грамицидином С и цетилпиридиния хлоридом были использованы штаммы микроорганизмов, являющиеся возбудителями инфекций ЛОР-органов. Одними из основных возбудителей инфекций ЛОР-органов, считаются Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus. В исследовании использовали штаммы клинических изолятов с охарактеризованной антибактериальной резистентностью различной степени широты:

Эталонный штамм - Streptococcus pneumoniaе ATCC 6303;

Клинические изоляты - Streptococcus pneumoniae 711/58 серотип 4, Streptococcus pneumoniaе 7670 серотип 13, Streptococcus pneumoniaе 7779 серотип 13, Streptococcus pneumoniaе 1068 серотип 19 А, Streptococcus pneumoniaе 8074 серотип 6 ABCD;

Эталонный штамм - Staphylococcus aureus ATCC 6538-Р;

Клинические изоляты - Staphylococcus aureus 758 (MRSA), Staphylococcus aureus 952 (MSSA), Staphylococcus aureus 402 (MRSA), Staphylococcus aureus 299 (MRSA), Staphylococcus aureus 176 (MRSA).

Определение антимикробной активности тестируемых объектах проводили методом микроразведений в планшетах с определением основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериальных препаратов - величины минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Приготовленные рабочие растворы тестируемых объектов (итоговая концентрация по действующему веществу от 256 мкг/мл до 1 мкг/мл) вносили в 96-луночные планшеты. В каждую лунку, содержащую необходимое количество раствора исследуемого объекта, добавляли инокулюм штамма микроорганизма в заданной концентрации. В качестве положительного контроля использовали лунки, содержащие питательную среду инокулированную микроорганизмом, в качестве отрицательного контроля использовали лунки с питательной средой.

После добавления всех агентов планшеты закрывали крышками и инкубировали в термостате. Через 19 ч после инкубации результаты учитывали визуально в проходящем свете, при достаточном росте тест-микроорганизма, то есть при явном помутнении или изменении цвета питательной среды. Минимальной подавляющей концентрации исследуемых объектов соответствовала лунка с наименьшей концентрацией исследуемых объектов без признаков видимого роста тест-микроорганизмов (прозрачный бульон или цвет среды не изменился).

После определения МПК были сделаны высевы со всех лунок без признаков видимого роста на чашки Петри с плотной питательной средой для определения МБК. Минимальная бактерицидная концентрация - это минимальная концентрация антибиотика в питательной среде, при которой проявляется его бактерицидное действие по отношению к возбудителю. За МБК принимают концентрацию, обеспечивающую гибель 99,99% клеток микробной популяции.

Результаты определения антибактериальной активности представлены в Таблице 3. По результатам проведенного исследования установлено, что фармацевтическая композиция обладает антимикробной активностью в отношении всех исследованных штаммов Streptococcus pneumoniaе и Staphylococcus aureus. Наличие вспомогательных веществ в антибактериальной композиции не препятствовали высвобождению действующих веществ Грамицидина С и Цетилпиридиния и не влияли на их бактерицидное действие. Полученные значения МПК и МБК, в подавляющем большинстве случаев различающиеся не более чем в 4 раза, демонстрируют наличие у антибактериальной композиции высокой бактерицидной активности в отношении типичных возбудителей инфекционно-воспалительной патологии ЛОР-органов и, в частности, патологии ротоглотки, что позволяет эффективно ее применять в клинической практике.

Таблица 1. Состав вспомогательных веществ заявляемой антибактериальной композиции и сравнение с прототипом
№	Заявляемая фармацевтическая композиция (состав 3)	Масса, мг	Прототип «Граммидин® нео»	Масса, мг
1	Маннитол	256,75	кремния диоксид коллоидный	5
2	Кросповидон	33	тальк	60
3	Сорбитол	32	ацесульфам калия	15
4	2-гидроксипропил-β-циклодекстрин	25	ароматизатор мятный	25
5	аспартам (Е951)	8	сорбитол	1065,75
6	ароматизатор «зеленое яблоко»	8	магния стеарат	25
7	ароматизатор «корица»	5
8	полиэтиленгликоль 4000	4

Таблица 2. Данные стабильности антибактериальной композиции (Состав 3 Пример 1) в тесте ускоренного хранения (40оС, 75% влажности). Вид упаковки 1 - стрип из пленки буфлен (PAP/PE/ALU/PE); 2 - стрип из пленки ПЭТ/Ф/ПЭТ/ПЭ
Вид упаковки	Срок хранения, сут
	0	22	45	90	180
	Содержание действующих веществ, исходные значения грамицидин С - 3 мг; цетилпиридиния хлорид - 1 мг; допускается разброс значений ±10%
1	2,94±0,05 1,14±0,02	3,12±0,07 1,11±0,03	3,07±0,02 0,96±0,01	3,10±0,01 1,09±0,03	2,99±0,06 1,15±0,03
2	2,94±0,05 1,14±0,02	3,01±0,04 1,04±0,02	3,09±0,05 0,98±0,02	3,07±0,09 1,08±0,05	3,04±0,01 1,15±0,00

Таблица 3. Антибактериальная активность заявляемой антибактериальной композиции в сравнении с грамицидином С и цетилпиридиния хлоридом
№ п/п	Тест микроорганизм	Грамицидин С		Цетилпиридиния хлорид		Фармацевтическая композиция
		МПК	МБК	МПК	МБК	МПК	МБК
	Streptococcus pneumoniaе ATCC 6303	4	8	8	8	4	4
	Streptococcus pneumonia 711/58 серотип 4	16	16	16	32	8	16
	Streptococcus pneumonia 1068	4	4	16	16	4	4
	Streptococcus pneumonia 7670	4	4	8	16	4	4
	Streptococcus pneumonia 7779	4	4	8	16	4	4
	Streptococcus pneumonia 8074	4	4	8	16	4	4
	Staphylococcus aureus ATCC 6538-P	2	2	2	2	2	2
	Staphylococcus aureus 176	4	8	2	8	4	8
	Staphylococcus aureus 299	4	8	4	4	4	8
	Staphylococcus aureus 402	2	8	2	4	2	4
	Staphylococcus aureus 758	2	2	2	4	2	2
	Staphylococcus aureus 952	2	8	2	2	2	4

Формула изобретения

1. Антибактериальный комплекс, характеризующийся тем, что состоит из 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина, грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли (в пересчете на грамицидин С), цетилпиридиния хлорида или его моногидрата (в пересчете на цетилпиридиния хлорид) в массовом соотношении 6-100:3:1.

2. Антибактериальный комплекс по п. 1, характеризующийся тем, что массовое соотношение компонентов составляет 25:3:1.

3. Антибактериальная композиция для приготовления раствора для местного или наружного применения, характеризующаяся тем, что она выполнена в форме таблетки, содержащей антибактериальный комплекс по п. 1 в качестве активного начала и маннитол, кросповидон, сорбитол, аспартам, полиэтиленгликоль 4000 в качестве вспомогательных компонентов при следующем содержании компонентов:

антибактериальный комплекс - 10,0-104,0 мг;

маннитол – 230,0-270,0 мг;

кросповидон – 30,0-36,0 мг;

сорбитол – 29,0-35,0 мг;

аспартам – 6,0-10,0 мг;

полиэтиленгликоль 4000 – 3,0-5,0 мг.

4. Антибактериальная композиция по п. 3, характеризующаяся тем, что она дополнительно содержит в качестве вспомогательных веществ, по крайней мере один ароматизатор.

5. Способ получения антибактериальной композиции для приготовления раствора для местного или наружного применения по п. 3 или 4, характеризующийся тем, что получают антибактериальный комплекс по п. 1 путем растворения цетилпиридиния хлорида или его моногидрата и 2-гидроксипропил-β-циклодекстрина в воде, перемешивания до прозрачного раствора, добавления к раствору грамицидина С или его фармацевтически приемлемой соли, перемешивания в течение 40-50 мин до получения прозрачного или слабо опалесцирующего раствора, замораживания раствора, лиофильного высушивания с последующим добавлением к полученному комплексу вспомогательных веществ, перемешиванием и таблетированием.

6. Применение композиции по п. 3 для получения антибактериального средства местного или наружного действия в виде водного раствора.