(12) ЗАЯВКА НА ИЗОБРЕТЕНИЕ

(57) Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, содержащая любой один или более чем один из следующих:

i) растворимый гликопротеин CD52,

ii) слитый белок, содержащий растворимый гликопротеин CD52 в качестве первого белка и второй белок;

iii) полинуклеотид, кодирующий пептидную часть растворимого гликопротеина CD52 по разделу i) или слитый белок по разделу и);

iv) вектор, содержащий полинуклеотид по разделу iii);

v) выделенная клетка, содержащая полинуклеотид по разделу iii) или вектор по разделу iv);

vi) выделенная клетка CD52^hi, способная продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

vii) выделенная популяция клеток, содержащая множество клеток CD52^hi, способных продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

viii) среда культуры клеток или ее фракция, содержащая растворимый гликопротеин CD52, выделенный из культуры клеток, содержащей клетку по разделу vi) или популяцию клеток по разделу vii); и

ix) агент, способный увеличивать уровень экспрессии растворимого гликопротеина CD52 клеткой;

и фармацевтически приемлемый носитель.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой растворимый гликопротеин CD52 содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 60% идентичную аминокислотной последовательности любой одной или более чем одной из GQNDTSQTSSPS (SEQ ID NO: 3), SQNATSQSSPS (SEQ ID NO: 4), GQATTAASGTNKNSTSTKKTPLKS (SEQ ID NO: 5), GQNSTAVTTPANKAATTAAATTKAAATTATKTTTAVRKTPGKPPKA (SEQ ID NO: 6) или GNSTTPRMTTKKVKSATPA (SEQ ID NO:7), и углевод.

3. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой гликопротеин содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% идентичной или на 100% идентичной любой одной или более чем одной из аминокислотных последовательностей, идентифицированных в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 или 7.

4. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой любой один или более чем один из растворимого гликопротеина CD52, слитого белка, полинуклеотида, вектора, клетки, популяции клеток, среды культуры клеток и агента присутствует в достаточном количестве для подавления функции эффекторной Т-клетки и/или иммунного ответа.

5. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 связана с одним или более чем одним из остатков аспарагина, серина, треонина, тирозина, гидроксилизина, гидроксипролина, фосфосерина или триптофана, если они присутствуют в аминокислотной последовательности.

6. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 связана с остатком аспарагина (N) в SEQ ID NO: 3.

7. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 представляет собой любой углевод, для которого известно, что он присоединен к внеклеточной части растворимого гликопротеина CD52 в клетке-хозяине, такой как лимфоцит-хозяин или клетка половых путей-хозяин.

8. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 содержит один или более чем один би-, три-или тетраантенный сахар, который может быть сиалированным на конце.

9. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой любой один или более чем один из растворимого гликопротеина CD52, слитого белка, клетки, популяции клеток, среды культуры клеток и агента способен подавлять функцию эффекторной Т-клетки и/или способен уменьшать иммунный ответ.

10. Фармацевтическая композиция по п. 9, где иммунный ответ представляет собой иммунный ответ на аутоантиген.

11. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой слитый белок содержит второй белок, который содержит фрагмент антитела.

12. Фармацевтическая композиция по п. 11, в которой фрагмент антитела представляет собой Fc.

13. Фармацевтическая композиция по п. 1, где композиция содержит один или более чем один из растворимого гликопротеина CD52, слитого белка, среды культуры клеток или агента, и она приготовлена для введения через слизистую и/или чрескожного введения.

14. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-13, которая, кроме того, содержит инсулин и/или аутоантиген.

15. Слитый белок, содержащий растворимый гликопротеин CD52 в качестве первого белка и второй белок.

16. Слитый белок по п. 15, в котором растворимый гликопротеин CD52 содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% идентичной или на 100% идентичной любой одной или более чем одной из аминокислотных последовательностей, идентифицированных в SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 или 7.

17. Слитый белок по п. 15, в котором углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 связана с одним или более чем одним из остатков аспарагина, серина, треонина, тирозина, гидроксилизина, гидроксипролина, фосфосерина или триптофана, если они присутствуют в аминокислотной последовательности.

18. Слитый белок по п. 15, в котором углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 связана с остатком аспарагина (N) в SEQ ID NO: 3.

19. Слитый белок по п. 15, в котором углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 представляет собой любой углевод, для которого известно, что он присоединен к внеклеточной части растворимого гликопротеина CD52 в клетке-хозяине, такой как лимфоцит-хозяин или клетка половых путей-хозяин.

20. Слитый белок по п. 15, в котором углеводная часть растворимого гликопротеина CD52 содержит один или более чем один би-, три- или тетраантенный сахар, который может быть сиалированным на конце.

21. Слитый белок по п. 15, который способен подавлять функцию эффекторной Т-клетки и/или способен уменьшать иммунный ответ.

22. Слитый белок по п. 21, где иммунный ответ представляет собой иммунный ответ на аутоантиген.

23. Слитый белок по любому из пп. 15-22, в котором второй белок содержит фрагмент антитела.

24. Слитый белок по п. 23, в котором фрагмент антитела представляет собой Fc.

25. Выделенный или рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий слитый белок по любому из пп. 15-24.

26. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 25.

27. Выделенная клетка, содержащая полинуклеотид по п. 25 или вектор по п. 26.

28. Способ получения слитого белка по любому из пп. 15-24, включающий проведение экспрессии полинуклеотида по п. 25 или вектора по п. 26 при условиях, обеспечивающих гликозилирование.

29. Способ по п. 28, при котором условия, обеспечивающие гликозилирование, включают проведение экспрессии слитого белка в клетке-хозяине, такой как клетка млекопитающего.

30. Применение любого одного или более чем одного из следующих:

i) растворимый гликопротеин CD52,

ii) слитый белок, содержащий растворимый гликопротеин CD52 в качестве первого белка и второй белок;

iii) полинуклеотид, кодирующий пептидную часть растворимого гликопротеина CD52 по разделу i) или слитый белок по разделу ii);

iv) вектор, содержащий полинуклеотид по разделу iii);

v) выделенная клетка, содержащая полинуклеотид по разделу iii) или вектор по разделу iv);

vi) выделенная клетка CD52^hi, способная продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

vii) выделенная популяция клеток, содержащая множество клеток CD52^hi, способных продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

viii) среда культуры клеток или ее фракция, содержащая растворимый гликопротеин CD52, выделенный из культуры клеток, содержащей клетку по разделу vi) или популяцию клеток по разделу vii);

ix) агент, способный увеличивать уровень экспрессии растворимого гликопротеина CD52 клеткой; и

x) фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-14,

для подавления функции эффекторных Т-клеток и/или для уменьшения иммунного ответа, такого как иммунный ответ на аутоантиген.

31. Способ лечения или предупреждения заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества любого одного или более чем одного из следующих:

i) растворимый гликопротеин CD52,

ii) слитый белок, содержащий растворимый гликопротеин CD52 в качестве первого белка и второй белок;

iii) полинуклеотид, кодирующий пептидную часть растворимого гликопротеина CD52 по разделу i) или слитый белок по разделу ii);

iv) вектор, содержащий полинуклеотид по разделу iii);

v) выделенная клетка, содержащая полинуклеотид по разделу iii) или вектор по разделу iv);

vi) выделенная клетка CD52^hi, способная продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

vii) выделенная популяция клеток, содержащая множество клеток CD52^hi, способных продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

viii) среда культуры клеток или ее фракция, содержащая растворимый гликопротеин CD52, выделенный из культуры клеток, содержащей клетку по разделу vi) или популяцию клеток по разделу vii);

ix) агент, способный увеличивать уровень экспрессии растворимого гликопротеина CD52 клеткой; и

x) фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-14.

32. Способ по п. 31, где заболевание, опосредованное функцией эффекторных Т-клеток, представляет собой аутоиммунное заболевание, такое как диабет типа I или ревматоидный артрит либо отторжение аллотрансплантата или реакцию «трансплантат против хозяина».

33. Способ по п. 31, где растворимый гликопротеин CD52, слитый белок, среду культуры клеток, агент или композицию вводят в сайт на слизистой или чрескожный сайт.

34. Применение любого одного или более чем одного из следующих:

i) растворимый гликопротеин CD52,

ii) слитый белок, содержащий растворимый гликопротеин CD52 в качестве первого белка и второй белок;

iii) полинуклеотид, кодирующий пептидную часть растворимого гликопротеина CD52 по разделу i) или слитый белок по разделу ii);

iv) вектор, содержащий полинуклеотид по разделу iii);

v) выделенная клетка, содержащая полинуклеотид по разделу iii) или вектор по разделу iv);

vi) выделенная клетка CD52^hi, способная продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

vii) выделенная популяция клеток, содержащая множество клеток CD52^hi, способных продуцировать растворимый гликопротеин CD52;

viii) среда культуры клеток или ее фракция, содержащая растворимый гликопротеин CD52, выделенный из культуры клеток, содержащей клетку по разделу vi) или популяцию клеток по разделу vii);

ix) агент, способный увеличивать уровень экспрессии растворимого гликопротеина CD52 клеткой; и

x) фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-14,

в изготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса.

35. Применение по п. 34, где заболевание, опосредованное функцией эффекторных Т-клеток, представляет собой аутоиммунное заболевание, такое как диабет типа I или ревматоидный артрит.

36. Применение по п. 34, где состояние, опосредованное функцией эффекторных Т-клеток, представляет собой отторжение аллотрансплантата или реакцию "трансплантат против хозяина".

37. Применение по п. 34, при котором лекарственное средство готовят для введения в сайт на слизистой или чрескожный сайт.

38. Способ проведения диагностики чувствительности субъекта к развитию заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса, включающий:

детектирование уровня растворимого гликопротеина CD52 в образце, взятом у субъекта; и

сравнение уровня растворимого гликопротеина CD52, детектированного в образце, взятом от субъекта, с контрольным уровнем, определенным у одного или более чем одного здорового субъекта,

в котором меньший уровень растворимого гликопротеина CD52, детектированного в образце, взятом от субъекта, по сравнению с контрольным уровнем указывает на то, что субъект имеет повышенную чувствительность к развитию заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сеписа.

39. Способ проведения диагностики чувствительности субъекта к развитию заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса, включающий:

детектирование частоты клеток CD52^hi в образце, взятом от субъекта; и

сравнение частоты клеток CD52 ^hi, детектированной в образце, взятом от субъекта, с контрольным уровнем, определенным у одного или более чем одного здорового субъекта,

в котором меньшая частота клеток CD52^hi, детектированных в образце, взятом от субъекта, по сравнению с контрольным уровнем указывает на то, что субъект имеет повышенную чувствительность к развитию заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сеписа.

40. Способ проведения диагностики чувствительности субъекта к развитию заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса, включающий:

детектирование активности клеток CD52^hi в образце, взятом от субъекта; и

сравнение активности клеток CD52^hi, детектированной в образце, взятом от субъекта, с контрольным уровнем, определенным у одного или более чем одного здорового субъекта,

в котором пониженная активность клеток CD52^hi, детектированная в образце, взятом от субъекта, по сравнению с контрольным уровнем, указывает на то, что субъект имеет повышенную чувствительность к развитию заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сеписа.

41. Способ по п. 39, в котором частоту клеток CD52^hi определяют детектированием уровня мембраносвязанного CD52 в образце путем детектирования уровня экспрессии белка CD52 в образце и/или детектирования уровня экспрессии мРНК CD52 в образце.

42. Способ по любому из пп. 38-41, в котором образец берут от субъекта, которому был введен антиген.

43. Способ по любому из пп. 38-41, в котором образец берут из места локального заболевания у субъекта.

44. Способ определения пригодности субъекта для включения в испытание по скринингу лекарственного средства, включающий проведение способа по любому из пп. 36-41 и идентификацию субъекта как являющегося более подходящим для включения в испытание по скринингу лекарственного средства, если субъект имеет более низкий уровень растворимого гликопротеина CD52, меньшую частоту клеток CD52^hi или пониженную активность клеток CD52^hi, чем контрольный образец.

45. Способ по п. 44, в котором испытание по скринингу лекарственного средства представляет собой испытание по скринингу противодиабетического лекарственного средства.

46. Способ идентификации агента, способного имитировать подавление эффекторных Т-клеток и/или подавление иммунного ответа, функции растворимого гликопротеина CD52, включающий определение того, подавляет ли тестируемый агент функцию эффекторных Т-клеток и/или иммунный ответ.

47. Способ идентификации потенциального терапевтического агента для лечения или предупреждения заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса, включающий приведение в контакт тестируемого агента с клеткой CD52^hi или популяцией клеток CD52^hi и детектирование любого одного или более чем одного из уровня растворимого гликопротеина CD52, продуцируемого клеткой или популяцией клеток, частоты клеток CD52^hi и/или активности клеток CD52^hi и идентификацию тестируемого агента в качестве потенциального терапевтического агента для лечения или предупреждения заболевания или состояния, опосредованного функцией эффекторных Т-клеток, воспаления или сепсиса, если уровень растворимого гликопротеина CD52, частота клеток CD52^hi и/или активность клеток CD52^hi увеличивается после контакта с тестируемым агентом.